| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| ·减毒沙门氏菌载体系统的研究进展 | 第10-13页 |
| ·减毒沙门氏菌为载体的优点 | 第10-11页 |
| ·减毒沙门氏菌为载体的缺点及改进方法 | 第11页 |
| ·减毒沙门氏菌载体在国内的应用 | 第11-12页 |
| ·减毒沙门氏菌的稳定性表达 | 第12-13页 |
| ·沙门氏菌的纤溶活性 | 第13页 |
| ·t-PA 的研究进展 | 第13-15页 |
| ·t-PA 的结构特征与作用机制 | 第13-14页 |
| ·t-PA 的功能及应用 | 第14-15页 |
| ·利用转基因生物反应器生产 t-PA | 第15-17页 |
| ·t-PA 在原核和真核细胞中的表达 | 第15-16页 |
| ·t-PA 在转基因生物反应器中的表达 | 第16-17页 |
| ·t-PA 对动物纤溶和凝血系统的作用 | 第17-18页 |
| ·研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 第2章 重组减毒沙门氏菌载体的构建与鉴定 | 第20-37页 |
| ·实验材料 | 第20-25页 |
| ·质粒和菌种及其培养条件 | 第20-22页 |
| ·工具酶和试剂 | 第22-23页 |
| ·主要试剂和培养基的配制 | 第23-24页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·主要实验器材 | 第24页 |
| ·DNA 分析软件 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-30页 |
| ·pcDNA_3-tPA 真核表达载体的构建 | 第25页 |
| ·pET28-tPA 原核表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·PYA3493-tPA 原核表达载体的构建 | 第26页 |
| ·t-PA 基因的扩增、回收纯化、克隆 | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化、质粒提取及鉴定 | 第27-29页 |
| ·重组减毒沙门氏菌的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-35页 |
| ·目的基因的克隆 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第31-33页 |
| ·重组菌的 PCR 鉴定 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 第3章 重组减毒沙门氏菌的体外表达与检测 | 第37-48页 |
| ·材料与试剂 | 第37-39页 |
| ·主要试验材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要溶液及配制方法 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·重组菌 crpSL1344(pET28-tPA)诱导表达 | 第39页 |
| ·重组菌减毒沙门氏菌的稳定性 | 第39-40页 |
| ·BHK 细胞的复苏与体外培养 | 第40页 |
| ·细胞计数 | 第40页 |
| ·BHK 细胞的转染 | 第40页 |
| ·BHK 中表达产物的 SDS-PAGE 电泳与 Western blotting 检测 | 第40-41页 |
| ·BHK 表达产物的 ELISA 检测 | 第41页 |
| ·BHK 表达产物的琼脂糖平板溶圈法检测 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·重组菌的稳定性 | 第41-42页 |
| ·感染细胞后的形态学变化 | 第42-43页 |
| ·SDS-PAGE 电泳与 Western blotting 鉴定 | 第43-44页 |
| ·表达产物的 ELISA 检测 | 第44-45页 |
| ·表达产物的活性检测结果 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 携带 t-PA 基因的重组减毒沙门氏菌在小鼠体内表达与活性检测 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48-50页 |
| ·菌种 | 第48-49页 |
| ·实验动物 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-52页 |
| ·实验动物分组与设计 | 第50页 |
| ·菌液的制备 | 第50页 |
| ·t-PA 活性的测定 | 第50页 |
| ·小鼠抗凝血模型的建立 | 第50-51页 |
| ·样本处理要求及检测方法 | 第51页 |
| ·检测指标及方法 | 第51-52页 |
| ·数据处理 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-53页 |
| ·3 种重组减毒沙门氏菌的活性 | 第52页 |
| ·重组菌对小鼠体内抗凝血模型的作用 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 第5章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第63页 |
