| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1 猪链球菌的分类 | 第11页 |
| 2 猪链球菌的生物学性状 | 第11页 |
| 3 猪链球菌流行病学 | 第11-12页 |
| 4 猪链球菌病的新特点 | 第12-13页 |
| 5 猪链球菌致病机制研究进展 | 第13-14页 |
| 6 猪链球菌的毒力因子 | 第14-22页 |
| ·荚膜多糖CPS | 第14-15页 |
| ·肽聚糖脱乙酰酶PGDA | 第15-16页 |
| ·分型酶sortase | 第16-17页 |
| ·溶菌酶释放蛋白MRP和胞外释放因子EF | 第17-18页 |
| ·透明质酸酶HlyA | 第18页 |
| ·SAO | 第18页 |
| ·混浊因子OFS | 第18-19页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白FBPS | 第19页 |
| ·精氨酸降解酶ArcA | 第19页 |
| ·甘油醛-3-磷酸脱氢酶GAPDH | 第19-20页 |
| ·烯醇化酶Enolase | 第20页 |
| ·猪溶素suilysin | 第20-22页 |
| 7 研究方法进展 | 第22-24页 |
| ·基因敲除 | 第22页 |
| ·猪链球菌动物模型的研究 | 第22-24页 |
| ·猪链球菌其他研究方法 | 第24页 |
| 8 研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 SLY基因敲除和互补株的构建 | 第25-35页 |
| 1 材料 | 第25-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·细菌培养 | 第27-28页 |
| ·敲除载体的构建 | 第28-29页 |
| ·电转化 | 第29页 |
| ·敲除突变体的筛选和鉴定 | 第29-30页 |
| ·生物活性测定 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-34页 |
| ·敲除载体pSET4s-sly的构建和突变体的筛选 | 第31-32页 |
| ·突变体测序结果 | 第32页 |
| ·生物活性分析 | 第32-34页 |
| 4 小结与讨论 | 第34-35页 |
| ·小结 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 SLY基因的毒力功能及其相关机制 | 第35-50页 |
| 1 材料 | 第35-36页 |
| ·菌株 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-39页 |
| ·ICR小鼠攻毒实验 | 第36-37页 |
| ·不同感染途径对ICR小鼠血中菌量的影响 | 第37页 |
| ·病理实验 | 第37页 |
| ·Trans well模型体外穿膜实验 | 第37-38页 |
| ·胆固醇(CHO)及TLR4抑制剂对Trans well穿膜的抑制实验 | 第38页 |
| ·细胞因子的测定 | 第38页 |
| ·数据统计分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-48页 |
| ·ICR小鼠攻毒实验 | 第39-40页 |
| ·不同感染途径对ICR小鼠血中菌量的影响 | 第40-42页 |
| ·SLY对ICR小鼠腹膜的影响 | 第42-43页 |
| ·体外模型验证SLY对穿透上皮细胞屏障的影响 | 第43-45页 |
| ·体外模型探究SLY影响穿透上皮屏障的通路 | 第45页 |
| ·SLY对ICR小鼠血中细胞因子的影响 | 第45-48页 |
| 4 小结与讨论 | 第48-50页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 猪溶血素突变体的构建及活性评价 | 第50-58页 |
| 1 材料 | 第50-52页 |
| ·菌株,质粒及引物 | 第50-51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| ·SLY突变体质粒的构建 | 第52页 |
| ·SLY突变体蛋白的表达 | 第52页 |
| ·SLY突变体蛋白的纯化 | 第52页 |
| ·重组蛋白的Western blotting鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白溶血活性测定 | 第53页 |
| ·SLY突变体蛋白的免疫原性评价 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-57页 |
| ·定点突变质粒的构建与鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的表达纯化 | 第54-55页 |
| ·重组SLY蛋白的溶血活性评价 | 第55页 |
| ·重组SLY突变体蛋白的免疫原性分析 | 第55-56页 |
| ·重组SLY突变体蛋白的保护活性评价 | 第56-57页 |
| 4 小结与讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 1 总结 | 第58-59页 |
| 2 展望 | 第59页 |
| 3 创新点 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 附录 | 第71-78页 |
| 附录Ⅰ 试剂盒操作步骤 | 第71-73页 |
| 附录Ⅱ 主要试剂的配制 | 第73-75页 |
| 附录Ⅲ E.COLI DH5A感受态的制备方法 | 第75-76页 |
| 附录Ⅳ 猪链球菌感受态的制备方法 | 第76页 |
| 附录Ⅴ WESTERN-BLOT操作流程 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 科研成果 | 第79页 |