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利用酵母双杂交系统筛选与BmNPVPE38和VLF-1相互作用的蛋白

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第1章 绪论第13-23页
   ·杆状病毒概述第13-16页
     ·杆状病毒的概念与分类第13页
     ·核型多角体病毒与宿主的作用第13-16页
   ·杆状病毒的基因的研究进展第16-18页
     ·杆状病毒的基因组序列第16页
     ·与病毒复制相关的基因第16-17页
     ·与病毒转录相关的基因第17-18页
     ·与病毒表达相关的基因第18页
   ·酵母双杂交的应用第18-20页
     ·酵母双杂交的原理第18-19页
     ·酵母双杂交技术的应用第19-20页
   ·本论文研究的主要工作第20-23页
第2章 感染 BmNPV 家蚕中肠组织 cDNA 文库的构建第23-37页
   ·实验材料第23-26页
     ·菌种来源第23页
     ·实验主要试剂第23页
     ·常用溶液和培养基的配制第23-25页
     ·主要实验仪器和设备第25-26页
   ·实验方法第26-31页
     ·获取感染家蚕核型多角体病毒(BmNPV)中肠第26页
     ·提取感染家蚕核型多角体病毒(BmNPV)中肠的总 RNA第26页
     ·RT-PCR 扩增第26-28页
     ·琼脂糖凝胶的制备与电泳第28页
     ·用 CHROMA SPIN TE-400 Columns 方法纯化 cDNA第28页
     ·将纯化 cDNA 转入 Y187 酵母菌株第28-30页
     ·酵母文库的鉴定第30页
     ·酵母文库插入片度的鉴定第30-31页
   ·实验结果第31-35页
     ·总 RNA 的制备第31-33页
     ·cDNA 纯化前后的琼脂糖凝胶电泳第33-34页
     ·cDNA 文库的质量鉴定第34-35页
   ·讨论第35-37页
第3章 诱饵的构建第37-47页
   ·实验材料第37页
     ·家蚕核型多角体病毒第37页
     ·实验主要试剂第37页
     ·常用溶液培养基的配制第37页
     ·主要实验仪器和设备第37页
     ·生物信息学分析软件第37页
   ·实验方法第37-43页
     ·目的基因的克隆第37-40页
     ·目的基因连接到 PGBKT-7 载体第40-41页
     ·质粒 PGBKT-7-bait 转入酵母细胞第41-42页
     ·酵母转化效率的鉴定第42页
     ·诱饵载体转入酵母细胞自激活检测和毒性检测第42页
     ·酵母质粒的 PCR 鉴定第42-43页
   ·结果与分析第43-45页
     ·目的片段的克隆第43页
     ·目的片段与 pGBKT7 载体连接第43-45页
     ·重组质粒转入酵母 Y2HGold 感受态细胞及其转化效率第45页
     ·诱饵毒性检测第45页
     ·自激活性的检测第45页
     ·酵母重组质粒的鉴定第45页
   ·讨论第45-47页
第4章 文库筛选实验及阳性克隆的鉴定第47-57页
   ·实验材料第47页
     ·供试菌株第47页
     ·实验主要试剂第47页
     ·常用溶液和培养基的配制第47页
     ·主要实验仪器和设备第47页
     ·生物信息学分析软件第47页
   ·实验方法第47-50页
     ·杂交对照试验第47-48页
     ·酵母诱饵菌株筛选 cDNA 文库第48-49页
     ·涂布平板并计算杂交效率及筛选的克隆总数第49页
     ·筛选杂合子并进行测序第49-50页
   ·实验结果第50-53页
     ·杂交对照试验结果第50-51页
     ·杂交结果的显微镜观察第51页
     ·计算杂交的转化效率和筛选的克隆总数第51-52页
     ·筛选杂合体并进行测序的实验结果第52-53页
   ·讨论第53-57页
结论第57-59页
参考文献第59-63页
攻读学位期间发表的学术论文第63-65页
致谢第65页

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