| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-21页 |
| ·鱼类体液免疫概述 | 第13页 |
| ·鱼类免疫器官 | 第13-15页 |
| ·胸腺 | 第13页 |
| ·肾脏 | 第13-14页 |
| ·脾脏 | 第14页 |
| ·黏膜相关淋巴组织 | 第14-15页 |
| ·鱼类免疫细胞 | 第15-16页 |
| ·B 淋巴细胞特性 | 第15页 |
| ·浆细胞类群 | 第15-16页 |
| ·鱼类抗体的研究 | 第16页 |
| ·鱼类体液免疫记忆 | 第16-17页 |
| ·鱼类免疫研究方法及进展 | 第17-20页 |
| ·ELISA 检测抗体效价 | 第17-18页 |
| ·淋巴细胞的分离技术 | 第18页 |
| ·ELISPOT 检测免疫细胞 | 第18-20页 |
| ·研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 罗非鱼淋巴细胞分离 | 第21-27页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要溶液配制 | 第21-22页 |
| ·实验鱼 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-23页 |
| ·尾静脉采血 | 第22页 |
| ·淋巴细胞分离 | 第22页 |
| ·细胞计数 | 第22-23页 |
| ·数据整理 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-25页 |
| ·罗非鱼外周血淋巴细胞分离结果 | 第23-24页 |
| ·分离细胞的形态观察 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-27页 |
| ·稀释倍数对外周血淋巴细胞分离的影响 | 第25-26页 |
| ·离心力对外周血淋巴细胞分离的影响 | 第26-27页 |
| 3 ELISPOT 试验最优条件的确定 | 第27-34页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·溶液配制 | 第27-28页 |
| ·实验鱼 | 第28页 |
| ·免疫 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-30页 |
| ·鼠抗罗非鱼 IgM 与 HRP-羊抗鼠 IgG 最佳结合比例 | 第28-29页 |
| ·外周血淋巴细胞的分离 | 第29页 |
| ·细胞计数 | 第29页 |
| ·IgG 包被浓度的确定 | 第29页 |
| ·细胞孵育时间的确定 | 第29-30页 |
| ·数据整理 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·鼠抗罗非鱼 IgM 与羊抗鼠 HRP-IgG 最佳工作浓度 | 第30页 |
| ·包被抗原浓度的确定 | 第30-31页 |
| ·细胞孵育时间的确定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 4 首次和二次免疫后罗非鱼特异性 ASC 及血清抗体水平检测 | 第34-41页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·溶液配制 | 第34页 |
| ·实验鱼 | 第34页 |
| ·免疫 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·淋巴细胞悬液制备 | 第34页 |
| ·细胞计数 | 第34-35页 |
| ·特异性 ASC 检测 | 第35页 |
| ·血清抗体水平检测 | 第35页 |
| ·数据整理 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·首次免疫后三种组织中特异性 ASCs 的检测 | 第35-36页 |
| ·二次免疫后三种组织中特异性 ASCs 的检测 | 第36-37页 |
| ·首次免疫及二次免疫后血清中特异性抗体水平检测 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| 5 MTT 法检测罗非鱼淋巴细胞体外增殖 | 第41-46页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·仪器设备 | 第41-42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·溶液配制 | 第42页 |
| ·实验鱼 | 第42页 |
| ·免疫 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·淋巴细胞悬液制备 | 第42页 |
| ·细胞计数 | 第42页 |
| ·正交试验设计 | 第42页 |
| ·MTT 法筛选最佳培养条件 | 第42-43页 |
| ·最佳培养条件下检测淋巴细胞增殖 | 第43页 |
| ·数据整理 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·正交试验结果 | 第43-44页 |
| ·最佳条件下三种组织淋巴细胞增殖结果 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 6 ELISPOT 检测 B 淋巴细胞体外增殖 | 第46-54页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·仪器设备 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·溶液配制 | 第46页 |
| ·实验鱼 | 第46-47页 |
| ·免疫 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47页 |
| ·淋巴细胞悬液制备 | 第47页 |
| ·细胞计数 | 第47页 |
| ·细胞体外培养及加入抗原刺激 | 第47页 |
| ·淋巴细胞中特异性 ASC 检测 | 第47页 |
| ·细胞培养液中抗体水平检测 | 第47页 |
| ·数据整理 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-51页 |
| ·特异性 ASC 体外存活检测结果 | 第47-49页 |
| ·加入抗原-人 IgG 孵育培养结果 | 第49-50页 |
| ·加入 LPS 刺激培养结果 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-54页 |
| ·头肾、脾脏和外周血中浆细胞的种类 | 第51-52页 |
| ·外源性抗原对三种组织中 B 淋巴细胞的增殖作用 | 第52-53页 |
| ·抗原 LPS 对三种组织中 B 淋巴细胞的增殖作用 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67-68页 |
| 导师简介 | 第68页 |
