| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-21页 |
| 1 黄喉拟水龟简介 | 第12页 |
| 2 龟类防病机制 | 第12-14页 |
| ·非特异性免疫 | 第12页 |
| ·特异性免疫 | 第12-14页 |
| ·免疫器官 | 第12-13页 |
| ·细胞免疫 | 第13页 |
| ·体液免疫 | 第13-14页 |
| ·影响免疫应答的因素 | 第14页 |
| 3 黏质沙雷氏菌 | 第14页 |
| 4 CCL20 基因研究进展 | 第14-18页 |
| ·CCL20 的分类 | 第14-15页 |
| ·CCL20 的结构 | 第15-16页 |
| ·CCL20 的功能 | 第16页 |
| ·CCL20 的研究进展 | 第16-18页 |
| 5 研究目的意义及技术路线 | 第18-21页 |
| ·研究目的意义 | 第18页 |
| ·技术路线 | 第18-21页 |
| 第二章 黄喉拟水龟 CCL20 基因序列特征与组织表达分析 | 第21-33页 |
| 1 材料与方法 | 第21-25页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·实验用龟 | 第21页 |
| ·实验试剂及试剂盒 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·基因组 cDNA 全长序列克隆 | 第21-23页 |
| ·cDNA 序列分析 | 第23页 |
| ·定量表达分析 | 第23-25页 |
| 2 结果 | 第25-31页 |
| ·MaCCL20 的 cDNA 序列分析 | 第25-27页 |
| ·MaCCL20 结构分析 | 第27-29页 |
| ·MaCCL20 的组织表达特征分析 | 第29-31页 |
| ·目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第29页 |
| ·目的基因和内参基因的溶解曲线 | 第29-30页 |
| ·黄喉拟水龟 CCL20 基因组织表达特征 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| ·黄喉拟水龟 CCL20 基因分子特征 | 第31页 |
| ·黄喉拟水龟 CCL20 组织表达特征 | 第31-33页 |
| 第三章 黄喉拟水龟 CCL20 重组表达及 WESTERN BLOT 分析 | 第33-45页 |
| 1 材料和方法 | 第33-40页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·主要试剂及菌种 | 第33页 |
| ·实验所用缓冲液及溶液 | 第33-36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·引物设计与合成 | 第36页 |
| ·MaCCL20 基因 ORF 框克隆及其质粒 DNA 的提取 | 第36-37页 |
| ·重组质粒 pET-32a-CCL20 的构建 | 第37-38页 |
| ·表达菌株的获得 | 第38页 |
| ·基因工程菌的初步诱导表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第39页 |
| ·重组蛋白的变性 | 第39页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第39页 |
| ·组蛋白的 Western blot 鉴定 | 第39-40页 |
| 2 结果 | 第40-44页 |
| ·黄喉拟水龟 CCL20 原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的纯化及 Western blot 鉴定 | 第42-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 总结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 硕士期间完成文章 | 第51-52页 |
| 附录 A 实验所用引物序列及作用 | 第52-53页 |
| 附录 B 主要仪器设备 | 第53-54页 |
| 附录 C 试剂及缓冲液的配置 | 第54-56页 |
| 附录 D 缩略语表 | 第56-58页 |
| 附录 E PET-32A 载体图 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
