解脂酵母中pox4和pox6基因的敲除以及对γ-癸内酯产量的影响
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·γ-癸内酯介绍 | 第8-12页 |
| ·γ-癸内酯的性质 | 第8-10页 |
| ·γ-癸内酯的用途 | 第10页 |
| ·γ-癸内酯的研究概述 | 第10-12页 |
| ·耶罗威亚酵母介绍 | 第12页 |
| ·β-氧化与pox基因简介 | 第12-13页 |
| ·基因敲除介绍 | 第13-15页 |
| ·基因敲除技术概述 | 第13页 |
| ·实现基因敲除的多种原理和方法 | 第13-15页 |
| ·基因敲除技术的缺点 | 第15页 |
| ·Cre/loxP系统介绍 | 第15-20页 |
| ·Cre/loxP系统概述 | 第15-16页 |
| ·Cre/loxP系统的原理 | 第16页 |
| ·Cre/loxP系统的优点 | 第16页 |
| ·Cre/loxP系统的作用机制 | 第16-17页 |
| ·Cre/loxP系统的基因敲除的操作步骤 | 第17-18页 |
| ·Cre/loxP系统的研究进展 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·实验材料与仪器 | 第20-23页 |
| ·菌种与质粒 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-36页 |
| ·引物设计及配置 | 第23-28页 |
| ·pUG6和pSH65质粒DNA的制备 | 第28-29页 |
| ·pox基因敲除组件的构建 | 第29-30页 |
| ·pox基因的敲除 | 第30-33页 |
| ·筛选标记的切除 | 第33-34页 |
| ·发酵生产γ-癸内酯产量的条件 | 第34页 |
| ·γ-癸内酯产量的测定 | 第34-36页 |
| 3 实验结果与分析 | 第36-65页 |
| ·PCR分段合成pox4基因敲除组件 | 第36-44页 |
| ·多步PCR法 | 第36-40页 |
| ·长引物一步PCR法 | 第40-44页 |
| ·长引物合成pox4和pox6的基因敲除组件 | 第44页 |
| ·克隆子的验证 | 第44-53页 |
| ·转换克隆子平板图 | 第45页 |
| ·探索性验证实验 | 第45-48页 |
| ·大规模验证实验 | 第48-53页 |
| ·PCR鉴定正确的菌株小结及其培养 | 第53-56页 |
| ·KanMX抗性基因的切除 | 第56-59页 |
| ·pSH65质粒提取及鉴定 | 第56-57页 |
| ·pSH65质粒转化 | 第57-58页 |
| ·KanMX抗性基因的诱导切除 | 第58-59页 |
| ·气相色谱测定γ-癸内酯产量 | 第59-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-73页 |
| 7 攻读硕士学位期间论文发表及专利申请情况 | 第73-74页 |
| 8 致谢 | 第74页 |
