编码磷酸酯酶新基因的克隆、表达及产物的生化性质鉴定
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| ·磷酸酯酶的研究概况 | 第11-15页 |
| ·碱性磷酸酯酶 | 第11-13页 |
| ·酸性磷酸酯酶 | 第13-14页 |
| ·磷酸二酯酶 | 第14-15页 |
| ·磷酸酯酶的分类 | 第15-18页 |
| ·按功能分类 | 第15-17页 |
| ·按结构域分类 | 第17-18页 |
| ·磷酸酯酶的结构 | 第18-20页 |
| ·磷酸酯酶的作用机理 | 第20-22页 |
| ·磷酸酯酶的应用 | 第22-24页 |
| ·未培养微生物 | 第24-25页 |
| ·本课题研究意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-40页 |
| ·文库来源 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26-27页 |
| ·常用抗生素、培养基和培养条件 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·培养条件 | 第27页 |
| ·菌种保存 | 第27-28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·使用试剂 | 第28页 |
| ·常用溶液和缓冲液 | 第28-30页 |
| ·所用仪器 | 第30页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
| ·PCR(聚合酶链式反应)扩增目标DNA | 第31-32页 |
| ·DNA酶切 | 第32-33页 |
| ·限制性内切酶酶切DNA | 第32页 |
| ·试剂盒法回收DNA片段 | 第32-33页 |
| ·DNA的连接 | 第33页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第33-34页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·外源DNA的转化 | 第34页 |
| ·基因的表达与蛋白检测 | 第34-35页 |
| ·基因的表达 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质电泳检测 | 第35页 |
| ·亲和层析纯化目标蛋白 | 第35-36页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第36-40页 |
| ·绘制蛋白质浓度标准曲线 | 第36-37页 |
| ·磷酸酯酶的酶活测定 | 第37-40页 |
| 第三章 磷酸酯酶编码基因的生物信息学分析 | 第40-50页 |
| ·引言 | 第40页 |
| ·磷酸酯酶基因phopl的克隆 | 第40-42页 |
| ·磷酸酯酶基因的生物信息学分析 | 第42-49页 |
| ·核苷酸序列和氨基酸序列分析 | 第42页 |
| ·Phop1的亲疏水性分析 | 第42-43页 |
| ·Phop1的跨膜结构分析 | 第43-44页 |
| ·Phop1的功能结构域分析 | 第44-45页 |
| ·Phop1的多重序列比较分析 | 第45-48页 |
| ·Phop1的分子进化关系分析 | 第48页 |
| ·Phop1二级结构预测 | 第48-49页 |
| ·结论 | 第49-50页 |
| 第四章 phop1基因在大肠杆菌中的表达 | 第50-56页 |
| ·引言 | 第50页 |
| ·PCR扩增phop1基因 | 第50-51页 |
| ·phop1基因重组质粒的构建 | 第51-53页 |
| ·phop1基因的诱导表达和纯化 | 第53-55页 |
| ·结论 | 第55-56页 |
| 第五章 Phop1蛋白生化性质的鉴定与分析 | 第56-66页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·Phop1蛋白的生化性质分析 | 第56-65页 |
| ·Phop1的最适pH | 第57页 |
| ·Phop1的pH耐受性 | 第57-58页 |
| ·Phop1的最适温度 | 第58-59页 |
| ·Phop1的温度耐受性 | 第59-60页 |
| ·Phop1的热稳定性 | 第60-61页 |
| ·Phop1对不同金属离子的敏感性 | 第61页 |
| ·EDTA对Phop1的影响 | 第61-62页 |
| ·Phop1的酶促动力学初步研究 | 第62-63页 |
| ·磷酸氢二钠对Phop1的抑制作用 | 第63-65页 |
| ·Phop1在最适条件下的酶活力的计算 | 第65页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| 第六章 讨论与展望 | 第66-70页 |
| ·结论 | 第66-68页 |
| ·磷酸酯酶基因phop1的生物信息学分析 | 第66页 |
| ·磷酸酯酶基因phop1的克隆与表达 | 第66-67页 |
| ·Phop1的生化性质鉴定 | 第67-68页 |
| ·讨论 | 第68页 |
| ·展望 | 第68-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第83页 |
