| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 第一章 真核表达虎纹捕鸟蛛毒素HW11c40的突变体 | 第19-32页 |
| ·前言 | 第19-21页 |
| ·材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·真核表达质粒与菌株 | 第21页 |
| ·试剂及仪器 | 第21-22页 |
| ·真核表达培养基 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·PCR定点突变 | 第22-23页 |
| ·载体和PCR产物的酶切和纯化 | 第23-24页 |
| ·载体和目的片段连接 | 第24页 |
| ·重组后的载体转化 | 第24页 |
| ·菌落PCR及公司测序鉴定 | 第24-25页 |
| ·多肽毒素的表达 | 第25-26页 |
| ·蛋白的纯化(离子交换和反相HPLC) | 第26页 |
| ·质谱鉴定 | 第26-27页 |
| ·实验结果 | 第27-30页 |
| ·HW11c40突变体的克隆 | 第27页 |
| ·重组质粒构建后菌落PCR鉴定与公司测序验证 | 第27-28页 |
| ·分泌表达和纯化结果 | 第28-29页 |
| ·质谱鉴定 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| ·表达载体和表达系统的选择 | 第30-31页 |
| ·关于HW11c40突变体酿酒酵母表达可行性的探讨 | 第31-32页 |
| 第二章 原核周质表达HWTX-XI和HW11c40的突变体 | 第32-62页 |
| ·前言 | 第32-33页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·表达质粒与菌株 | 第33页 |
| ·试剂及仪器 | 第33-34页 |
| ·原核周质表达HWTX-XI和HW11c40突变体的实验方法 | 第34-42页 |
| ·构建表达载体 | 第34-37页 |
| ·融合蛋白表达和纯化 | 第37-40页 |
| ·酶切获取目的蛋白 | 第40-41页 |
| ·镍柱分离目的蛋白 | 第41页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| ·质谱鉴定 | 第42页 |
| ·用删除突变的方法构建重组载体 | 第42-47页 |
| ·引物设计 | 第42-43页 |
| ·PCR克隆毒素片段 | 第43页 |
| ·载体和PCR产物的酶切 | 第43-44页 |
| ·载体和目的片段连接 | 第44页 |
| ·菌落PCR及公司测序鉴定 | 第44页 |
| ·删除多余氨基酸 | 第44-46页 |
| ·目的重组载体转化 | 第46-47页 |
| ·菌落PCR及公司测序鉴定 | 第47页 |
| ·HWTX-XI原核周质表达的条件摸索 | 第47-48页 |
| ·KpnIHWTX-XI的蛋白表达 | 第47页 |
| ·不同IPTG浓度诱导表达 | 第47页 |
| ·不同温度对蛋白表达的影响 | 第47页 |
| ·不同时间对蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-57页 |
| ·以KpnⅠ和XhoⅠ为酶切位点的HWTX-XI及HW11c40突变体的克隆 | 第48页 |
| ·重组质粒构建后菌落PCR鉴定与公司测序验证 | 第48-49页 |
| ·删除突变法构建重组载体 | 第49-51页 |
| ·原核表达和纯化 | 第51-52页 |
| ·蛋白酶切 | 第52-54页 |
| ·目的蛋白的分离纯化和质谱鉴定 | 第54-55页 |
| ·HWTX-XI融合蛋白在不同条件下的表达结果 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-62页 |
| ·表达载体和表达系统的选择 | 第57-58页 |
| ·对HW11c40进行基因突变的根据和意义 | 第58-59页 |
| ·不同的方法构建重组载体 | 第59页 |
| ·HWTX-XI和HW11c40的突变体在该系统表达中的特殊性 | 第59页 |
| ·表达条件优化 | 第59-60页 |
| ·新表达方法的可行性及意义 | 第60-62页 |
| 第三章 主要实验结论与进一步研究设想 | 第62-63页 |
| ·主要实验结论和意义 | 第62页 |
| ·进一步的研究设想 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-73页 |
| 综述 | 第73-84页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位论文期间主要研究成果 | 第85页 |
