| 中英文缩略表 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-31页 |
| ·植物无融合生殖的概念与研究意义 | 第16页 |
| ·苹果属植物的无融合生殖研究现状 | 第16-20页 |
| ·苹果属无融合生殖资源与类型 | 第16-18页 |
| ·平邑甜茶无融合生殖发育特性研究现状 | 第18-19页 |
| ·无融合生殖的遗传特性研究 | 第19页 |
| ·苹果属无融合生殖资源的生产应用 | 第19-20页 |
| ·无融合生殖分子机理研究 | 第20-24页 |
| ·无融合生殖的表观遗传调控模型 | 第20-22页 |
| ·无融合生殖的表观遗传调控分子机制 | 第22-24页 |
| ·无融合生殖发育相关基因的研究进展 | 第24-30页 |
| ·调控雌配子体早期发育模式的基因 | 第25-26页 |
| ·调控胚及胚乳发育的基因 | 第26-28页 |
| ·其他相关基因的调控 | 第28-30页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第30-31页 |
| 2 材料和方法 | 第31-59页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·植物材料及生长条件 | 第31页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第31页 |
| ·酶、抗生素、试剂盒、各种化学药品及生化试剂 | 第31-32页 |
| ·PCR 引物 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-59页 |
| ·杂交后代单性生殖率及倍性测定 | 第33页 |
| ·LSCM 观察胚囊发育 | 第33页 |
| ·柱头活性检测及荧光观察 | 第33-34页 |
| ·延长平邑甜茶柱头活性 | 第34页 |
| ·苹果基因组表达谱分析 | 第34页 |
| ·植物组织总 RNA 提取 | 第34-36页 |
| ·反转录 cDNA 第一链的合成 | 第36页 |
| ·植物基因组 DNA 的提取及纯化 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第38-39页 |
| ·碱法小量质粒 DNA 的提取 | 第39页 |
| ·质粒 DNA 的酶切鉴定 | 第39-40页 |
| ·DNA 序列测定 | 第40页 |
| ·目的片段的回收 | 第40-41页 |
| ·根癌农杆菌 GV3101/LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第41-42页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第41页 |
| ·电转法转化农杆菌 | 第41-42页 |
| ·表达载体的构建 | 第42-44页 |
| ·MhFIE、MhMSI1 过量表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·MhFIE、MhMSI1 融合蛋白表达载体的构建 | 第43页 |
| ·PGEX-MhMSI1 原核表达载体的构建 | 第43页 |
| ·pSPYNE-MhFIE、MhMSI1, pSPYCE-MhFIE、MhMSI1 双分子荧光互补载体的构建原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·植物材料的栽培、转化及转基因植株分析 | 第44-47页 |
| ·拟南芥幼苗的萌发与移栽 | 第44页 |
| ·苹果细胞悬浮系的培养 | 第44页 |
| ·植物的转化 | 第44-47页 |
| ·拟南芥转化 | 第44-45页 |
| ·洋葱表皮的转化 | 第45页 |
| ·苹果的转化 | 第45-46页 |
| ·苹果愈伤的转化 | 第46页 |
| ·番茄的转化 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的分析 | 第47-48页 |
| ·蛋白技术 | 第48-50页 |
| ·原核表达 MhMSI1 蛋白 | 第48页 |
| ·纯化 MhMSI1 蛋白 | 第48页 |
| ·纯化步骤 | 第48-49页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第49页 |
| ·快速银染法 | 第49页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第49-50页 |
| ·植物总蛋白的提取 | 第50页 |
| ·抗体制备 | 第50-51页 |
| ·Western blot 分析蛋白 | 第51页 |
| ·转膜（湿转法） | 第51页 |
| ·Western blot | 第51页 |
| ·酵母双杂转化方法 | 第51-52页 |
| ·凝胶变动迁移率实验 EMSA | 第52-56页 |
| ·EMSA 探针标记 | 第52-53页 |
| ·生物素标记 EMSA 探针的准备 | 第53页 |
| ·制备 6%非变性聚丙烯酰胺凝胶 | 第53-54页 |
| ·DNA 探针与蛋白质结合 | 第54页 |
| ·电泳和转膜 | 第54-55页 |
| ·核酸（DNA）检测方法 | 第55-56页 |
| ·染色质免疫共沉淀（ChIP） | 第56-57页 |
| ·染色质交联 | 第56-57页 |
| ·乙烯含量测定 | 第57-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-90页 |
| ·平邑甜茶无融合生殖发育与遗传特性分析 | 第59-69页 |
| ·平邑甜茶进行兼性无融合生殖 | 第59页 |
| ·平邑甜茶具有高度的单性生殖能力和无融合非减数分裂能力 | 第59-60页 |
| ·平邑甜茶的 2n 胚囊可以正常受精 | 第60页 |
| ·无融合生殖材料中的胚囊发育迟滞现象 | 第60-63页 |
| ·花期的划分 | 第60-61页 |
| ·平邑甜茶胚囊发育迟滞和多胚现象 | 第61-63页 |
| ·胚囊发育迟滞现象在苹果属无融合生殖资源中普遍存在 | 第63页 |
| ·花期温度影响无融合生殖率 | 第63-66页 |
| ·花期温度影响柱头寿命和胚囊成熟 | 第64-65页 |
| ·柱头寿命影响杂种率 | 第65-66页 |
| ·单性生殖与无融合非减数分裂是两个独立的遗传事件 | 第66-69页 |
| ·无融合生殖相关基因的克隆与功能鉴定 | 第69-90页 |
| ·MhFIE 基因的克隆与功能鉴定 | 第70-81页 |
| ·MhFIE 基因的分子克隆与功能互补 | 第70-72页 |
| ·MhFIE 的亚细胞定位与表达分析 | 第72-74页 |
| ·在不同植物材料异位表达 MhFIE 及其功能鉴定 | 第74-81页 |
| ·MhFIE 转基因表达载体构建 | 第74页 |
| ·拟南芥转基因植株的表型分析 | 第74-77页 |
| ·番茄转基因植株的表型分析 | 第77-81页 |
| ·MhMSI1 基因的克隆与功能鉴定 | 第81-90页 |
| ·MhMSI1 序列的分析与亚细胞定位 | 第81-82页 |
| ·MhMSI1 过量表达导致植株矮化并抑制果实的成熟 | 第82-86页 |
| ·MhMSI1 可以结合到 MdMET1 启动子上 | 第86-90页 |
| ·苹果愈伤活体验证 MhMSI1 直接结合到 MdMET1 启动子上（ChIP） | 第87-88页 |
| ·EMSA 离体验证 MhMSI1 结合到 MdMET1 启动子上 | 第88-90页 |
| 4 讨论 | 第90-94页 |
| ·苹果属无融合生殖材料的无融合生殖方式 | 第90页 |
| ·苹果属无融合生殖材料通过 FLD 策略逃避受精 | 第90-91页 |
| ·平邑甜茶单性生殖能力与无融合非减数分裂是独立的遗传事件 | 第91页 |
| ·高度的无融合生殖性状不能通过有性杂交传递给后代 | 第91-92页 |
| ·无融合生殖的分子机制研究 | 第92-94页 |
| 5 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-105页 |
| 附录 | 第105-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第117页 |
