| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩写表 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-37页 |
| 第一章 植物细胞活性氧信号转导及其调控基因表达 | 第11-35页 |
| ·活性氧的产生、清除及其调控的生理反应 | 第11-18页 |
| ·活性氧的产生 | 第11-13页 |
| ·活性氧的清除 | 第13-14页 |
| ·活性氧参与调控的生理反应 | 第14-18页 |
| ·活性氧与细胞凋亡 | 第14-15页 |
| ·活性氧与气孔运动 | 第15-18页 |
| ·活性氧与植物生长发育 | 第18页 |
| ·活性氧的信号转导及其基因表达 | 第18-27页 |
| ·活性氧感受的分子机制 | 第18-20页 |
| ·活性氧与与分裂原活化的蛋白激酶MAPK信号转导 | 第20-22页 |
| ·活性氧与胞质自由Ca~(2+) | 第22-23页 |
| ·活性氧与NO | 第23页 |
| ·活性氧与G蛋白 | 第23-25页 |
| ·活性氧、NADPH氧化酶与ABA信号转导 | 第25-26页 |
| ·活性氧与乙烯、水杨酸、茉莉酸甲酯 | 第26-27页 |
| ·活性氧的应答机制 | 第27-31页 |
| ·原核生物的应答机制 | 第27-29页 |
| ·酵母中的应答机制 | 第29-30页 |
| ·植物中的应答机制 | 第30-31页 |
| ·参与活性氧信号转导的转录因子 | 第31-32页 |
| ·真核生物转录因子活性的调控方式 | 第32-34页 |
| ·展望 | 第34-35页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第35-37页 |
| 第二部分 研究报告 | 第37-105页 |
| 第三章 GPX3与COLD6之间的相互作用分析 | 第37-63页 |
| 一 前言 | 第37-38页 |
| 二 材料与方法 | 第38-49页 |
| ·质粒载体与菌株 | 第38页 |
| ·实验试剂 | 第38页 |
| ·实验溶液 | 第38-40页 |
| ·酵母实验溶液 | 第38-40页 |
| ·分离原生质体所需溶液 | 第40页 |
| ·原生质体转化所需溶液 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-49页 |
| ·植物总RNA的提取及cDNA的合成 | 第40页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第40-41页 |
| ·酵母双杂交检测蛋白质相互作用 | 第41-43页 |
| ·GST Pull-down验证蛋白体外互作 | 第43-46页 |
| ·与目的蛋白体外互作区域分析 | 第46页 |
| ·双分子荧光互补瞬时表达验证植物细胞内蛋白互作 | 第46-48页 |
| ·实验所需引物 | 第48-49页 |
| 三 实验结果 | 第49-60页 |
| ·COLD6参与了植物对ABA、H202等胁迫的反应 | 第49-50页 |
| ·酵母双杂交检测拟南芥基因GPX3和COLD6之间的相互作用 | 第50-52页 |
| ·酵母双杂交重组载体构建 | 第50-51页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的检测 | 第51-52页 |
| ·GST Pull-Down验证GPX3与COLD6的相互作用 | 第52-54页 |
| ·pGEX-2TK-GPX3的载体构建 | 第52页 |
| ·pCITE-COLD6的载体构建 | 第52-53页 |
| ·GST Pull-down验证GPX3与COLD6的相互作用 | 第53-54页 |
| ·酵母双杂交检测COLD6中与GPX3相互作用的结构域 | 第54-56页 |
| ·COLD6结构域分析及其pACT2重组载体的构建 | 第54-55页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的显色 | 第55-56页 |
| ·利用BiFC检测GPX3与COLD6的体内互作 | 第56-58页 |
| ·BiFC重组载体的构建 | 第56-57页 |
| ·BiFC检测GPX3与COLD6之间的体内相互作用 | 第57-58页 |
| ·利用免疫共沉淀检测GPX3与COLD6的体内相互作用 | 第58-60页 |
| ·瞬时重组表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·免疫共沉淀检测GPX3与COLD6的体内相互作用 | 第59-60页 |
| 四 讨论 | 第60-63页 |
| 第四章 COLD6与HRF1之间的相互作用分析 | 第63-79页 |
| 一 前言 | 第63页 |
| 二 材料与方法 | 第63-69页 |
| ·质粒载体与菌株 | 第63-64页 |
| ·实验试剂 | 第64页 |
| ·实验溶液 | 第64-65页 |
| ·酵母所需溶液 | 第64页 |
| ·体内免疫共沉淀所需溶液 | 第64页 |
| ·原生质体所需溶液 | 第64-65页 |
| ·原生质体转化所需溶液 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-69页 |
| ·总RNA的提取及cDNA的合成 | 第65页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第65-66页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第66页 |
| ·酵母阳性克隆的筛选(β-galactosidase filter assays) | 第66-67页 |
| ·β-galactosidase活性的定量测定 | 第67页 |
| ·质粒大量提取纯化 | 第67-68页 |
| ·叶肉细胞原生质体的制备 | 第68页 |
| ·叶肉细胞原生质体的PEG转化 | 第68-69页 |
| ·激光共聚焦显微镜检测 | 第69页 |
| ·体内免疫共沉淀(Co-IP) | 第69页 |
| ·实验所需引物 | 第69页 |
| 三 实验结果 | 第69-75页 |
| ·酵母双杂交检测COLD6和HRF1之间的相互作用 | 第69-71页 |
| ·pAS2-HRF1载体的构建 | 第69-70页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的显色 | 第70-71页 |
| ·利用BiFC检测HRF1与COLD6的体内相互作用 | 第71-73页 |
| ·pSPYNE-HRF1重组载体的构建 | 第71-72页 |
| ·BiFC检测HRF1与COLD6之间的体内相互作用 | 第72-73页 |
| ·利用免疫共沉淀检测HRF1与COLD6的体内相互作用 | 第73-75页 |
| ·pRT105-Flag-HRF1瞬时重组表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·免疫共沉淀实验检测HRF1与COLD6的体内相互作用 | 第74-75页 |
| 四 讨论 | 第75-79页 |
| 第五章 COLD6的核质运动介导了氧化还原信号感受及转导 | 第79-103页 |
| 一 前言 | 第79-80页 |
| 二 材料与方法 | 第80-86页 |
| ·实验材料 | 第80页 |
| ·实验试剂 | 第80页 |
| ·实验溶液 | 第80-81页 |
| ·基本溶液 | 第80-81页 |
| ·分离原生质体所需溶液 | 第81页 |
| ·原生质体转化所需溶液 | 第81页 |
| ·实验方法 | 第81-86页 |
| ·植物材料的种植 | 第81-82页 |
| ·表皮生物学分析 | 第82页 |
| ·拟南芥杂交 | 第82页 |
| ·拟南芥基因组DNA的提取 | 第82页 |
| ·拟南芥总RNA的提取 | 第82-83页 |
| ·拟南芥总cDNA的合成 | 第83页 |
| ·PCR与半定量RT-PCR | 第83-84页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第84页 |
| ·T-DNA插入纯合体筛选方法 | 第84页 |
| ·离子的电渗漏检测 | 第84-85页 |
| ·鲜重的测定方法 | 第85页 |
| ·激光共聚焦显微测定技术 | 第85页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第85页 |
| ·所用引物 | 第85-86页 |
| 三 实验结果 | 第86-98页 |
| ·拟南芥GPX3的亚细胞定位 | 第86-89页 |
| ·拟南芥GPX3跨膜结构的生物信息学分析 | 第86-87页 |
| ·pT-GFP-MCS-GPX3瞬时表达载体的构建 | 第87-88页 |
| ·拟南芥叶片原生质体瞬时表达及GPX3的亚细胞定位 | 第88-89页 |
| ·COLD6的亚细胞定位 | 第89-90页 |
| ·COLD6结构的生物信息学预测 | 第89页 |
| ·pT-GFP-MCS-COLD6瞬时表达载体的构建 | 第89-90页 |
| ·拟南芥叶片原生质体瞬时表达及COLD6的亚细胞定位 | 第90页 |
| ·COLD6的核质运动介导了氧化胁迫信号转导 | 第90-92页 |
| ·胞质H_2O_2参与调节COLD6的核质运动 | 第92-93页 |
| ·拟南芥GPX3对COLD6的核质运动的影响 | 第93-94页 |
| ·突变体的遗传学表型分析 | 第94-97页 |
| ·双突变体和三突变体的构建与鉴定 | 第94-95页 |
| ·H_2O_2对双突变体及三突变体生长的影响 | 第95-96页 |
| ·ABA对双突变体及三突变体生长的影响 | 第96-97页 |
| ·下游基因表达的检测 | 第97-98页 |
| 四 讨论 | 第98-103页 |
| 第六章 结论 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
