| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-39页 |
| ·课题背景 | 第13-15页 |
| ·甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶 | 第15-22页 |
| ·甲烷氧化菌的代谢途径及分类 | 第16-19页 |
| ·MMO 的基因与蛋白结构 | 第19-21页 |
| ·MMO 的调控机制 | 第21-22页 |
| ·甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶的应用前景 | 第22-26页 |
| ·在生物修复中的应用 | 第23-24页 |
| ·在甲烷排放控制中的应用 | 第24-25页 |
| ·在工业生物催化中的应用 | 第25-26页 |
| ·其它方面的应用 | 第26页 |
| ·甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶的研究前沿 | 第26-35页 |
| ·甲烷氧化菌的培养工艺研究 | 第27页 |
| ·甲烷氧化菌及MMO 的工业生物催化研究 | 第27-30页 |
| ·甲烷氧化菌及MMO 的基因工程研究 | 第30-32页 |
| ·甲烷氧化菌的生态学研究 | 第32-35页 |
| ·甲烷氧化菌及甲烷单加氧酶在工业应用中存在的问题 | 第35-36页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第36-39页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第36-37页 |
| ·本论文的研究框架 | 第37-39页 |
| 第2章 碱性煤矿甲烷氧化菌群落的分子微生态学解析 | 第39-68页 |
| ·引言 | 第39-41页 |
| ·实验方法 | 第41-45页 |
| ·DNA 提取和纯化 | 第41页 |
| ·稳定性同位素探针标记 | 第41-42页 |
| ·PCR扩增16S rRNA和功能基因 | 第42-43页 |
| ·克隆文库的核酸限制性片段长度多态性分析 | 第43-44页 |
| ·变性梯度凝胶电泳 | 第44页 |
| ·DNA 芯片分析 | 第44页 |
| ·DNA 测序及进化树分析 | 第44页 |
| ·核酸序列 | 第44-45页 |
| ·煤矿概况及其土壤的特性分析 | 第45-47页 |
| ·煤矿土壤中甲烷氧化菌群落的功能基因解析 | 第47-57页 |
| ·基于功能基因pmoA 的RFLP 分析和生物芯片分析 | 第47-52页 |
| ·基于功能基因mmoX 的RFLP 分析 | 第52-54页 |
| ·基于功能基因mxaF 的RFLP 分析 | 第54-57页 |
| ·煤矿土壤中活性甲烷氧化菌群落的解析 | 第57-66页 |
| ·DNA-SIP 标记煤矿土壤和~(13)C-DNA 的分离 | 第57-58页 |
| ·基于16S rRNA 的RFLP 分析和 DGGE 分析 | 第58-62页 |
| ·基于pmoA 的 RFLP 分析和生物芯片分析 | 第62-65页 |
| ·基于mxaF 的 RFLP 分析 | 第65-66页 |
| ·本章小结 | 第66-68页 |
| 第3章 颗粒性甲烷单加氧酶的异源表达研究 | 第68-94页 |
| ·引言 | 第68-71页 |
| ·实验材料与方法 | 第71-76页 |
| ·菌株及质粒 | 第71-72页 |
| ·培养基及培养条件 | 第72-73页 |
| ·质粒提取 | 第73-74页 |
| ·PCR 扩增相应DNA 片段 | 第74页 |
| ·质粒转化方法 | 第74页 |
| ·基因工程菌的pMMO 转录分析 | 第74-75页 |
| ·基因工程菌的翻译分析 | 第75页 |
| ·基因工程菌的催化活性分析 | 第75-76页 |
| ·编码pMMO 基因簇的T-A 克隆 | 第76-79页 |
| ·pmo 基因簇的扩增和验证 | 第77-78页 |
| ·PCR 产物T-A 克隆及测序分析 | 第78-79页 |
| ·利用外源启动子调控pmoCAB 基因的外源表达研究 | 第79-87页 |
| ·利用pUC18 载体及 Plac启动子表达pmoCAB 的研究 | 第79-80页 |
| ·利用pCom10 载体及 PalkB启动子表达pmoCAB 的研究 | 第80-87页 |
| ·利用pMMO 原始启动子调控pmoCAB 基因的外源表达研究 | 第87-93页 |
| ·pCHP 质粒表达载体的构建 | 第87-88页 |
| ·连接产物的转化及筛选 | 第88-90页 |
| ·pCHP 质粒在产气肠杆菌、假单胞菌中的性质 | 第90-93页 |
| ·本章小节 | 第93-94页 |
| 第4章 石蜡油强化 M. trichosporium OB3b 培养的研究 | 第94-112页 |
| ·引言 | 第94-96页 |
| ·实验材料与方法 | 第96-99页 |
| ·菌株 | 第96页 |
| ·培养基及培养条件 | 第96-97页 |
| ·5L发酵罐培养M. trichosporium OB3b | 第97-98页 |
| ·M. trichosporium OB3b的OD_(660)与细胞干重的关系 | 第98页 |
| ·M. trichosporium OB3b的酶活分析 | 第98-99页 |
| ·摇瓶培养条件下石蜡油强化M. trichosporium OB3b生长的 研究 | 第99-102页 |
| ·甲烷在不同有机溶液中的溶解度 | 第100-101页 |
| ·石蜡油浓度对M. trichosporium OB3b生长的影响 | 第101-102页 |
| ·5L发酵罐中石蜡油强化M. trichosporium OB3b生长的研究 | 第102-105页 |
| ·石蜡油强化M. trichosporium OB3b 生长机理的探讨 | 第105-111页 |
| ·发酵体系中的石蜡油与菌体的相互作用 | 第105-109页 |
| ·发酵体系中的石蜡油对菌体活性的影响 | 第109-111页 |
| ·本章小节 | 第111-112页 |
| 第5章 M. trichosporium OB3b 催化氧化丙烯制环氧丙烷的研究 | 第112-130页 |
| ·引言 | 第112-113页 |
| ·实验材料与方法 | 第113-114页 |
| ·1,2-环氧丙烷标准曲线 | 第113-114页 |
| ·M. trichosporium OB3b 催化反应 | 第114页 |
| ·M. trichosporium OB3b 整细胞催化特性研究 | 第114-118页 |
| ·热稳定性 | 第114-116页 |
| ·最适反应温度 | 第116-118页 |
| ·缓冲溶液体系中整细胞催化氧化丙烯制环氧丙烷的优化 | 第118-121页 |
| ·丙烯初始浓度对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第118-119页 |
| ·磷酸缓冲溶液中甲酸钠浓度对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第119-120页 |
| ·磷酸缓冲溶液中MgCl_2浓度对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第120-121页 |
| ·利用高密度发酵细胞催化氧化丙烯生制环氧丙烷的研究 | 第121-125页 |
| ·细胞浓度对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第122-123页 |
| ·催化反应时间对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第123-125页 |
| ·发酵液直接催化丙烯生成环氧丙烷 | 第125-128页 |
| ·不同发酵阶段细胞浓度对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第126-127页 |
| ·催化反应时间对环氧丙烷积累浓度的影响 | 第127-128页 |
| ·本章小结 | 第128-130页 |
| 结论 | 第130-133页 |
| 参考文献 | 第133-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 附录A 主要实验仪器及试剂 | 第148-151页 |
| 一 实验仪器 | 第148-149页 |
| 二 化学试剂 | 第149-150页 |
| 三 基因操作酶和试剂盒 | 第150-151页 |
| 附录 B 质粒pCHP 中pmo 基因簇 DNA 序列 | 第151-155页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第155-156页 |
