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鸡白细胞介素2在毕赤酵母中的表达与生物活性分析

摘要第1-5页
Abstract第5-11页
第一章 引言第11-23页
   ·鸡白细胞介素2(ChIL-2)研究概况第11-17页
     ·ChIL-2 研究进展第11页
     ·ChIL-2 的发现及纯化第11-12页
     ·ChIL-2 的分子克隆和结构第12-13页
     ·ChIL-2 活性检测第13-14页
     ·ChIL-2 的表达第14-15页
     ·ChIL-2 的应用第15-17页
   ·研究目的与意义第17页
   ·研究内容与技术路线第17-18页
     ·研究内容第17-18页
     ·技术路线第18页
 参考文献第18-23页
第二章 ChIL-2 基因真核表达载体的构建和高抗性重组菌株的筛选及鉴定第23-40页
   ·实验材料第24-25页
     ·菌株与质粒第24页
     ·试剂第24页
     ·溶液第24-25页
     ·实验仪器第25页
   ·方法第25-31页
     ·获取目的DNA 片段第25-27页
     ·pPIC9K 质粒的小量抽提第27页
     ·双酶切目的 DNA 片段及pPIC9K 质粒第27-28页
     ·连接第28-29页
     ·转化第29页
     ·重组质粒的抽提及鉴定第29-30页
     ·重组酵母的筛选及鉴定第30-31页
   ·结果第31-35页
     ·目的基因的扩增及重组载体的构建第31-32页
     ·酶切鉴定重组质粒pPIC9K/ChIL-2第32-34页
     ·电转化毕赤酵母第34页
     ·高拷贝重组菌株的筛选第34-35页
   ·讨论第35-37页
     ·ChIL-2 基因的克隆第35页
     ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达机理第35页
     ·毕赤酵母的高效表达第35-37页
 参考文献第37-40页
第三章 ChIL-2 在毕赤酵母中的表达、发酵及纯化第40-55页
   ·材料第40-43页
     ·试剂第40页
     ·实验溶液第40-43页
   ·仪器第43页
   ·方法第43-47页
     ·重组酵母菌株生长曲线的测定第43页
     ·重组酵母菌株的诱导表达第43-44页
     ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第44-45页
     ·表达上清的浓缩及Western blot 鉴定第45-46页
     ·ChIL-2 在毕赤酵母中的发酵与纯化第46-47页
   ·结果第47-51页
     ·重组毕赤酵母摇瓶培养的生长曲线第47-48页
     ·ChIL-2 的摇瓶表达及鉴定第48-49页
     ·ChIL-2 的发酵生产第49页
     ·ChIL-2 的纯化第49-51页
   ·讨论第51-53页
     ·重组表达ChIL-2 分子量大小的讨论第51页
     ·发酵生产第51-53页
     ·纯化第53页
 参考文献第53-55页
第四章 表达蛋白的生物活性检测第55-67页
   ·材料第55-56页
     ·实验动物第55页
     ·试剂第55页
     ·实验溶液第55-56页
   ·仪器第56页
   ·方法第56-59页
     ·急性毒性实验研究第56页
     ·ChIL-2 对禽流感疫苗H5N1 亚型Re-1 株灭活苗的免疫增强效果研究第56-58页
     ·ChIL-2 对新城疫灭活苗的免疫增强效果研究第58-59页
   ·结果第59-64页
     ·对小鼠的安全性第59页
     ·ChIL-2 对禽流感疫苗H5N1 亚型Re-1 株灭活苗的免疫增强效果研究第59-62页
     ·ChIL-2 对新城疫灭活苗的免疫增强效果研究第62-64页
   ·讨论第64-66页
     ·血凝抑制试验第64-65页
     ·ChIL-2 的免疫增强效果第65-66页
 参考文献第66-67页
第五章 结论与展望第67-68页
致谢第68-69页
在学期间发表的学术论文第69页

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