| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| ·猪传染性胃肠炎概述 | 第11-12页 |
| ·病原 | 第11-12页 |
| ·病毒生长培养特征 | 第12页 |
| ·TGEV分子生物学研究进展 | 第12-16页 |
| ·基因织结构 | 第12-13页 |
| ·TGEV蛋白结构与功能 | 第13-15页 |
| ·TGEV的组织嗜性 | 第15-16页 |
| ·TGEV分子生物学诊断方法研究进展 | 第16-19页 |
| ·核酸探针杂交技术检测 TGEV | 第16-17页 |
| ·聚合酶链式反应检测 TGEV | 第17-18页 |
| ·TGEV与 PRCV的鉴别诊断方法 | 第18-19页 |
| ·展望 | 第19页 |
| ·荧光定量 PCR技术研究进展 | 第19-24页 |
| ·荧光定量 PCR定量原理 | 第20页 |
| ·常用的荧光定量 PCR仪 | 第20-21页 |
| ·荧光探针的种类及其作用原理 | 第21-22页 |
| ·荧光定量 PCR技术的优点 | 第22页 |
| ·荧光定量 PCR技术的应用 | 第22-24页 |
| ·研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 TaqMan荧光定量 RT-PCR检测 TGEV方法的建立与应用 | 第26-45页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·病毒与细胞 | 第26页 |
| ·病料 | 第26页 |
| ·载体与受体菌 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·引物与探针 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·病毒的增殖 | 第27页 |
| ·电镜观察 | 第27-28页 |
| ·TGEV组织培养半数感染量(TCID_(50))的测定(Reed-Muench法) | 第28页 |
| ·病毒 RNA及内参基因组的提取 | 第28页 |
| ·反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第28页 |
| ·PCR产物鉴定及纯化回收 | 第28-29页 |
| ·PCR产物连接与转化 | 第29-30页 |
| ·重组质粒提取、鉴定及序列测定 | 第30页 |
| ·质粒浓度测定 | 第30页 |
| ·荧光定量PCR的各种反应条件和参数摸索 | 第30-32页 |
| ·标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| ·敏感性试验 | 第33页 |
| ·特异性试验 | 第33页 |
| ·重复性试验 | 第33页 |
| ·现地病料的检测 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-41页 |
| ·电镜观察 | 第33-34页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第34页 |
| ·TGEVN基因与β-actin基因目的片断的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pMD-TGEVN和pMD-actin的构建与鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒浓度的测定 | 第35页 |
| ·荧光定量 RT-PCR反应条件的优化 | 第35页 |
| ·标准曲线的建立 | 第35-37页 |
| ·敏感性试验 | 第37-38页 |
| ·特异性试验 | 第38-39页 |
| ·重复性试验 | 第39-41页 |
| ·现地病料的检测 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-45页 |
| 第三章 TGEV S基因抗原位点的原核表达 | 第45-51页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·病毒 | 第45页 |
| ·菌体和载体 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·引物 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·目的基因的获得 | 第45页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白诱导表达及条件优化 | 第46页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第46页 |
| ·Western Blot检测 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-49页 |
| ·目的基因的获得 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的 PCR鉴定 | 第47页 |
| ·重组蛋白的表达鉴定及条件优化 | 第47页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第47页 |
| ·Western blot分析 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第59页 |
