| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-15页 |
| 1 绪论 | 第15-48页 |
| ·课题背景 | 第15-16页 |
| ·文献综述 | 第16-47页 |
| ·ADV概述 | 第16-20页 |
| ·ADV的分子生物学研究进展 | 第20-37页 |
| ·水貂阿留申病概述 | 第37-47页 |
| ·本课题的来源及主要内容 | 第47-48页 |
| 2 ADV的鉴定 | 第48-59页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·工具酶和试剂 | 第48页 |
| ·CIEP检测用抗原及对照血清与PCR检测用对照毒株 | 第48页 |
| ·仪器 | 第48-49页 |
| ·试剂配制 | 第49页 |
| ·PCR引物序列 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-54页 |
| ·病料采集及处理 | 第49-50页 |
| ·流行病学及症状调查 | 第50页 |
| ·CIEP检测 | 第50页 |
| ·PCR检测 | 第50-51页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第51-52页 |
| ·目的片段的克隆 | 第52-53页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第53-54页 |
| ·目的基因序列的测定和序列分析 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-56页 |
| ·流行病学和症状 | 第54页 |
| ·CIEP检测结果 | 第54页 |
| ·PCR检测结果 | 第54-55页 |
| ·序列分析结果 | 第55-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 3 四株ADV近全长序列测定及遗传变异分析 | 第59-86页 |
| ·材料 | 第59-60页 |
| ·实验毒株与参考毒株 | 第59-60页 |
| ·质粒与菌种 | 第60页 |
| ·工具酶和试剂 | 第60页 |
| ·仪器 | 第60页 |
| ·PCR引物 | 第60页 |
| ·方法 | 第60-61页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第60-61页 |
| ·PCR产物的胶回收 | 第61页 |
| ·目的片段的克隆 | 第61页 |
| ·阳性重组子的筛选与鉴定 | 第61页 |
| ·目的基因序列的测定 | 第61页 |
| ·序列分析 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-83页 |
| ·PCR扩增 | 第61-62页 |
| ·PCR扩增产物的克隆、鉴定 | 第62-63页 |
| ·本实验测得毒株与ADV参考毒株的序列比对分析 | 第63-82页 |
| ·ADV毒株与细小病毒亚科其它属代表毒株的序列比对分析 | 第82-83页 |
| ·讨论 | 第83-85页 |
| ·参考毒株的选择 | 第83页 |
| ·实验毒株与参考毒株之间的进化关系 | 第83-84页 |
| ·ADV与其它各属成员的进化关系分析 | 第84-85页 |
| ·本章小结 | 第85-86页 |
| 4 VP2主要抗原表位的表达及表达产物的抗原性检测 | 第86-111页 |
| ·材料 | 第86-89页 |
| ·病毒株 | 第86页 |
| ·菌种和质粒 | 第86页 |
| ·工具酶 | 第86页 |
| ·CIEP检测用抗原与血清 | 第86页 |
| ·试剂 | 第86-88页 |
| ·SDS-PAGE使用试剂配置 | 第88页 |
| ·Western-blot试剂配置 | 第88页 |
| ·仪器 | 第88-89页 |
| ·引物 | 第89页 |
| ·方法 | 第89-94页 |
| ·VP2a及VP2b的PCR反应 | 第89页 |
| ·PCR扩增目的片段的纯化 | 第89页 |
| ·VP2a及VP2b片段与pMD18-T simple载体的连接和转化 | 第89-90页 |
| ·pMD18-T阳性重组子的鉴定 | 第90页 |
| ·pMD18-T阳性重组子序列的测定 | 第90页 |
| ·原核表达载体pMAL-VP2a及pMAL-VP2b的构建 | 第90-91页 |
| ·重组pMAL-VP2a及pMAL-VP2b表达质粒的转化和鉴定 | 第91页 |
| ·重组质粒pMAL-VP2a及pMAL-VP2b的序列测定及抗原表位分析 | 第91页 |
| ·阳性重组质粒转化TB1感受态细胞 | 第91-92页 |
| ·pMAL-VP2a及pMAL-VP2b重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第92页 |
| ·菌体裂解物的SDS-PAGE电泳及表达位置的确定 | 第92页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第92页 |
| ·表达产物Western blot分析 | 第92-93页 |
| ·包涵体蛋白的提取与纯化 | 第93页 |
| ·CIEP检测 | 第93页 |
| ·表达蛋白与标准抗原CIEP检测结果的比较 | 第93-94页 |
| ·结果 | 第94-102页 |
| ·VP2a及VP2b的PCR扩增结果 | 第94页 |
| ·重组质粒PMD18-T-VP2a及PMD18-T-VP2b的PCR与酶切鉴定 | 第94-95页 |
| ·重组质粒PMD18-T-VP2a及PMD18-T-VP2b的测序 | 第95页 |
| ·重组原核表达载体pMAL-VP2a和pMAL-VP2b的鉴定 | 第95-96页 |
| ·重组质粒pMAL-VP2a和pMAL-VP2b的序列测定 | 第96-97页 |
| ·SDS-PAGE鉴定结果及重组蛋白最佳诱导条件的确定 | 第97-101页 |
| ·Western blot分析 | 第101页 |
| ·纯化回收后蛋白的浓度测定结果 | 第101-102页 |
| ·CIEP检测结果 | 第102页 |
| ·表达蛋白和标准抗原CIEP方法的比较试验结果 | 第102页 |
| ·讨论 | 第102-109页 |
| ·引物的设计 | 第102-103页 |
| ·目的片段的选择 | 第103页 |
| ·实验毒株的选择 | 第103-104页 |
| ·表达系统的选择 | 第104-107页 |
| ·重组表达载体的快速PCR鉴定 | 第107页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第107-108页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第108页 |
| ·包涵体的形成与纯化 | 第108页 |
| ·本实验所建立的CIEP诊断方法的特点 | 第108-109页 |
| ·本章小结 | 第109-111页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-122页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
