| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 第一章 肝细胞癌组织中DNA拷贝数的变异与基因转录水平的比较分析 | 第9-33页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 材料与方法 | 第11-19页 |
| 1. 组织样本 | 第11页 |
| 2. 肝癌细胞株 | 第11-12页 |
| 3. DNA提取 | 第12页 |
| 4. RNA提取 | 第12-13页 |
| 5. RT-PCR | 第13-14页 |
| 6. Real Time-PCR | 第14页 |
| 7. Microarray-based comparative genomic hybridization(CGH) | 第14-15页 |
| 8.基因表达谱检测 | 第15-18页 |
| 9. Image acquisition and data analysis | 第18-19页 |
| 结果与讨论 | 第19-27页 |
| 1、肝癌细胞不同染色体上DNA拷贝数的变异模式 | 第19-21页 |
| 2、DNA拷贝数的变化趋势与病例临床信息的关系 | 第21页 |
| 3、DNA拷贝数的变化趋势与对应的RNA表达水平的关系 | 第21-24页 |
| 4、4q21区载内的SPP1基因的扩增与与其转录上调的关系 | 第24-25页 |
| 5、1q21区域内TAGLN2基因的扩增与与其转录上调的关系 | 第25-27页 |
| 小结 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-33页 |
| 第二章 人类印迹基因或印迹相关基因在肝癌组织中的表达分析 | 第33-41页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| 1、印迹基因在肝癌中表达异常的发现 | 第34页 |
| 2、待筛选的基因目录 | 第34-35页 |
| 3、RT-PCR技术检测印迹基因在肝癌中的表达谱 | 第35页 |
| 4、部分差异表达印迹基因的简单综述 | 第35-38页 |
| 参考文献 | 第38-41页 |
| 第三章 DLK1基因在肝癌组织失调及其分子遗传学机制研究 | 第41-70页 |
| 材料与方法 | 第41-51页 |
| 1、细胞来源 | 第41页 |
| 2、组织来源 | 第41页 |
| 3、总RNA的抽提 | 第41-42页 |
| 4、DNA的抽提 | 第42页 |
| 5、半定量RT-PCR | 第42-44页 |
| 6、Real Time-PCR | 第44页 |
| 7、Northern Blotting | 第44-46页 |
| 8、免疫组织化学染色 | 第46-47页 |
| 9、去甲基化药物处理肝癌细胞株 | 第47-48页 |
| 10、DLK1染色体区段微卫星位点不稳定性分析 | 第48-49页 |
| 11、甲基化检测 | 第49-51页 |
| 结果 | 第51-66页 |
| 1、在RNA水平,DLK1在肝癌中的表达明显上调 | 第51-54页 |
| 2、在蛋白水平,DLK1在肝癌中的表达明显上调 | 第54-58页 |
| 3、DLK1-MEG3印迹结构域中其他基因的表达模式 | 第58-59页 |
| 4、DLK1在肝癌中表达增高的分子遗传学机制研究 | 第59-66页 |
| (1) DLK1基因在肝癌组织中失调的遗传学机制分析 | 第59-61页 |
| 1) 肝癌组织中DLK1微卫星标记不平衡性分析 | 第59-60页 |
| 2) 肝癌组织中DLK1基因DNA拷贝数水平分析 | 第60-61页 |
| 3) DLK1基因在肝癌组织中的突变状态分析 | 第61页 |
| (2) DLK1基因甲基化状态与在肝癌中表达异常的关系分析 | 第61-66页 |
| 1) DAC影响肝癌细胞株DLK1基因的表达 | 第61-62页 |
| 2) DAC影响肝癌细胞株中DLK1启动子区域甲基化水平 | 第62-63页 |
| 3) 肝癌组织中DLK1甲基化状态与表达水平关系 | 第63-66页 |
| 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第四章 DLK1对肝癌细胞生长的影响及潜在的信号通路研究 | 第70-96页 |
| 材料与方法 | 第70-86页 |
| 1、pcDNA3.0-DLK1全长ORF克隆 | 第70-71页 |
| 2、细胞培养和基因转染 | 第71-72页 |
| 3、细胞生长曲线绘制 | 第72-73页 |
| 4、细胞克隆形成实验 | 第73-74页 |
| 5、裸鼠成瘤实验 | 第74页 |
| 6、间接免疫荧光染色 | 第74-75页 |
| 7、细胞核抽提物的制备 | 第75-76页 |
| 8、Western Blot | 第76-77页 |
| 9、基因芯片检测 | 第77-80页 |
| 10、siRNA的设计及PSUPER质粒的构建 | 第80-82页 |
| 11、DLK1持续沉默的Huh-7稳定细胞株的构建 | 第82-86页 |
| 结果 | 第86-93页 |
| 1、DLK1在肝癌细胞株中表达模式分析 | 第86-87页 |
| 2、DLK1对SMMC7721细胞生长的促进作用 | 第87-88页 |
| 3、RNAi沉默DLK1基因后,肝癌细胞克隆能力明显下降 | 第88-90页 |
| 4、DLK1基因对肝癌细胞成瘤能力的影响 | 第90-92页 |
| 5、DLK1对肝癌细胞信号通路的影响分析 | 第92-93页 |
| 讨论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-96页 |
| 综述 | 第96-101页 |
| 在读期间发表的论文,申请的科研课题及专利 | 第101-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
