| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| ·纤维素酶对纤维素的降解 | 第10-11页 |
| ·纤维素酶简介 | 第11-13页 |
| ·纤维素酶的组成和分类 | 第11-12页 |
| ·纤维素降解酶系 | 第12-13页 |
| ·完全酶系和不完全酶系 | 第12-13页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶在洗涤剂工业中的应用 | 第13页 |
| ·纤维素酶在造纸行业的应用 | 第13页 |
| ·纤维素酶在畜牧业上的应用 | 第13-14页 |
| ·纤维素酶在其他行业的应用 | 第14页 |
| ·纤维素酶的研究进展 | 第14-17页 |
| ·纤维素酶基因的克隆和表达 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的生物化学与分子生物学研究进展 | 第15-16页 |
| ·产纤维素酶的主要微生物类群 | 第16-17页 |
| ·真菌类 | 第16-17页 |
| ·细菌类 | 第17页 |
| ·放线菌类 | 第17页 |
| ·纤维素酶研究的发展趋势 | 第17页 |
| ·纤维素酶的研究目的与意义 | 第17-18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| ·实验材料 | 第19-23页 |
| ·菌株 | 第19页 |
| ·质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·培养基配方 | 第21页 |
| ·主要溶液 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-37页 |
| ·细菌总 DNA 的提取 | 第23-24页 |
| ·扩增内切葡聚糖酶基因的 PCR 反应 | 第24页 |
| ·凝胶回收 PCR 产物 | 第24-25页 |
| ·目的片段与 T 载体的连接 | 第25页 |
| ·E .Coli 感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·目的片段的转化 | 第26页 |
| ·阳性克隆的筛选和鉴定 | 第26-27页 |
| ·枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第27-31页 |
| ·表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·凝胶回收酶切产物 | 第29页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·双酶切鉴定 | 第31页 |
| ·重组质粒的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的提取 | 第31页 |
| ·内切葡聚糖酶基因的诱导表达 | 第31-34页 |
| ·诱导表达过程 | 第31-32页 |
| ·诱导条件的优化 | 第32页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·绘制蛋白标准曲线 | 第33-34页 |
| ·蛋白含量测定 | 第34页 |
| ·内切葡聚糖酶酶活性的测定 | 第34-35页 |
| ·制作葡萄糖标准曲线 | 第34-35页 |
| ·纤维素酶酶活性的测定 | 第35页 |
| ·内切葡聚糖酶最适pH 的测定 | 第35页 |
| ·纤维素酶最适反应温度测定 | 第35页 |
| ·包涵体的分离 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| ·BACILLUS. SP. BS-1 的内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第37-41页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组DNA 的提取 | 第37页 |
| ·枯草芽孢杆菌bs-1 内切葡聚糖酶基因的扩增产物的电泳 | 第37-38页 |
| ·载体质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·载体和目的基因的双酶切 | 第38-39页 |
| ·表达载体的构建 | 第39-41页 |
| ·pQE-30 与目的片段的连接 | 第39-40页 |
| ·pET-28a（+）与目的片段的连接 | 第40页 |
| ·pET-30a（+）与目的片段的连接 | 第40-41页 |
| ·重组质粒测序 | 第41页 |
| ·内切葡聚糖酶的诱导表达 | 第41-45页 |
| ·初步表达 | 第41-42页 |
| ·表达条件的优化 | 第42-45页 |
| ·诱导温度的优化 | 第42-43页 |
| ·诱导时间的优化 | 第43-44页 |
| ·诱导 IPTG 浓度的优化 | 第44-45页 |
| ·内切葡聚糖酶酶学性质研究 | 第45-48页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第45-46页 |
| ·内切葡聚糖酶最适反应pH 的确定 | 第46-47页 |
| ·内切葡聚糖酶最适反应温度的确定 | 第47-48页 |
| ·枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶活性的测定 | 第48页 |
| ·内切葡聚糖酶活性测定的结果 | 第48页 |
| ·蛋白纯化及含量的测定 | 第48-51页 |
| ·蛋白含量标准曲线的绘制 | 第48-49页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第49-50页 |
| ·纯化蛋白的含量测定 | 第50页 |
| ·纯化蛋白的酶活性测定 | 第50页 |
| ·纯化蛋白的比活力 | 第50-51页 |
| ·包涵体的分离 | 第51-53页 |
| 4 讨论与结论 | 第53-59页 |
| ·枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因的克隆 | 第53页 |
| ·枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第53-55页 |
| ·测定枯草芽孢杆菌内切葡聚糖酶的最适条件 | 第55-57页 |
| ·内切葡聚糖酶在大肠杆菌中表达后纯化 | 第57-58页 |
| ·结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
