中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要 | 第9-12页 |
英文缩略表 | 第12-14页 |
第一部分 文献综述 | 第14-39页 |
1 热激蛋白与分子伴侣 | 第14-18页 |
·植物HSPs 的种类、功能和胁迫表达 | 第14-16页 |
·植物sHSPs 的分类 | 第16页 |
·植物sHSPs 的表达 | 第16页 |
·植物sHSPs 的功能 | 第16-17页 |
·植物HSPs 研究存在的问题与展望 | 第17-18页 |
2 内质网分子伴侣与胁迫 | 第18-32页 |
·内质网分子伴侣 | 第18-22页 |
·内质网胁迫(ER stress) | 第22页 |
·未折叠蛋白应答(unfold protein response, UPR) | 第22-29页 |
·ER stress 与程序性细胞死亡(programmed cell death, PCD) | 第29-31页 |
·UPR 研究存在问题与展望 | 第31-32页 |
3 植物的低温胁迫耐受机制 | 第32-35页 |
·低温伤害(冷害) | 第32页 |
·植物耐冷机制 | 第32-35页 |
·提高植物抗寒性存在的问题与展望 | 第35页 |
4 植物盐胁迫耐受机制 | 第35-39页 |
·渗透稳态的维持 | 第35-36页 |
·晚期胚胎发生富集蛋白(LEA 蛋白)与耐盐胁迫 | 第36页 |
·盐胁迫下离子稳态的维持 | 第36-37页 |
·SOS 信号通路 | 第37-38页 |
·去除毒害 | 第38页 |
·提高植物耐盐性存在的问题与展望 | 第38-39页 |
第二部分 实验论文 | 第39-104页 |
第一章 LeHSP21.5 的分子生物学特性分析 | 第39-58页 |
1 实验材料 | 第39-40页 |
2 实验方法 | 第40-51页 |
·质粒的提取 | 第40-41页 |
·质粒的纯化、酶切和连接 | 第41-42页 |
·质粒的转化 | 第42-43页 |
·番茄LeHSP21.5 基因的分子克隆 | 第43页 |
·番茄LeHSP21.5 基因的Southern 分析 | 第43-46页 |
·番茄植株生长与热激等胁迫处理 | 第46页 |
·番茄LeHSP21.5 基因的Northern 分析 | 第46-47页 |
·番茄LeHSP21.5 蛋白的Western 分析 | 第47-50页 |
·LeHSP21.5 蛋白的亚细胞定位分析 | 第50-51页 |
3 实验结果 | 第51-56页 |
·LeHSP21.5 系统进化分析 | 第51-52页 |
·LeHSP21.5 基因在番茄基因组中的Southern 杂交分析 | 第52页 |
·LeHSP21.5 基因的表达特性 | 第52-53页 |
·LeHSP21.5 蛋白的热诱导表达分析 | 第53-55页 |
·LeHSP21.5 蛋白的膜微囊泡定位分析 | 第55-56页 |
4、讨论 | 第56-58页 |
·LeHSP21.5 基因的热诱导表达特征 | 第56-57页 |
·LeHSP21.5 为内质网定位的小分子热激蛋白 | 第57-58页 |
第二章 转LeHSP21.5 基因番茄植株的获得及UPR 分析 | 第58-70页 |
1 实验材料 | 第58页 |
2 实验方法 | 第58-62页 |
·植物表达载体的构建 | 第58页 |
·植物表达载体的农杆菌转化 | 第58-59页 |
·番茄的培养与转化 | 第59-60页 |
·转基因番茄的遗传学分析 | 第60页 |
·转基因番茄的PCR 分析 | 第60页 |
·转基因番茄的Southern 分析 | 第60页 |
·转基因番茄的Northern 分析 | 第60页 |
·转基因番茄的Western 分析 | 第60页 |
·转基因番茄的DTT 抗性分析 | 第60-61页 |
·转基因番茄的衣霉素抗性分析 | 第61-62页 |
3 实验结果 | 第62-68页 |
·LeHSP21.5 基因过量表达载体的构建以及番茄的转化 | 第62页 |
·转LeHSP21.5 基因番茄的PCR 鉴定和遗传学分析 | 第62-63页 |
·转LeHSP21.5 基因番茄的分子鉴定 | 第63-65页 |
·过量表达LeHSP21.5 增强番茄的DTT 抗性 | 第65页 |
·过量表达LeHSP21.5 减缓DTT 处理下Calnexin 的表达 | 第65-66页 |
·过量表达LeHSP21.5 增强番茄的衣霉素抗性 | 第66-67页 |
·过量表达LeHSP21.5 减缓了衣霉素诱导的UPR | 第67-68页 |
4 讨论 | 第68-70页 |
第三章 转LeHSP21.5 基因番茄植株的耐温度胁迫分析 | 第70-85页 |
1 实验材料 | 第70页 |
2 实验方法 | 第70-73页 |
·番茄的耐热性分析 | 第70页 |
·番茄的耐冷性分析 | 第70页 |
·基本生理指标的测定 | 第70-73页 |
·果实耐冷藏指标的测定 | 第73页 |
·低温胁迫下植物的Northern 分析 | 第73页 |
3、结果与分析 | 第73-81页 |
·过量表达LeHSP21.5 对植物耐热性的影响 | 第73页 |
·过量表达LeHSP21.5 提高番茄植株的耐冷性 | 第73-78页 |
·过量表达LeHSP21.5 提高番茄果实的耐冷藏性 | 第78-79页 |
·过量表达LeHSP21.5 减缓了低温下番茄中的UPR 应答 | 第79-81页 |
4 讨论 | 第81-85页 |
·过量表达LeHSP21.5 增强转基因番茄的耐冷性 | 第81-82页 |
·转LeHSP21.5 基因番茄耐冷机制的探讨 | 第82-83页 |
·过量表达LeHSP21.5 蛋白没有增强番茄的耐热能力 | 第83-85页 |
第四章 转LeHSP21.5 基因番茄的耐盐性分析 | 第85-96页 |
1 实验材料 | 第85页 |
2 实验方法 | 第85-86页 |
·番茄的盐胁迫处理 | 第85页 |
·基本生理指标的测定 | 第85-86页 |
·盐胁迫下植物的Northern 和Western 分析 | 第86页 |
3 结果与分析 | 第86-93页 |
·盐胁迫下转LeHSP21.5 基因植株的表型 | 第86页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株鲜、干重和相对含水量的影响 | 第86-87页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株体内Na~+、K~+、Ca~(2+)含量及K~+/Na~+比的影响 | 第87-88页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株体内脯氨酸和可溶性糖含量的影响 | 第88-89页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株MDA 含量和相对电导率的影响 | 第89-90页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株体内SOD 酶活的影响 | 第90-91页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株叶绿素含量的影响 | 第91页 |
·盐胁迫对转基因与对照植株叶片光合速率、细胞间隙CO_2 的浓度和气孔导度的影响 | 第91页 |
·盐胁迫对转基因植株与对照植株最大光化学效率PSⅡ的影响 | 第91-92页 |
·过量表达LeHSP21.5 减缓了盐胁迫下番茄中的UPR 应答 | 第92-93页 |
4 讨论 | 第93-96页 |
·过量表达LeHSP21.5 减轻了盐胁迫造成的ER stress | 第93-94页 |
·过量表达LeHSP21.5 增强转基因番茄耐盐性机理的探讨 | 第94-96页 |
第五章 过量表达LeHSP21.5 减缓UPR 机理的初步探讨 | 第96-104页 |
1 实验材料 | 第96页 |
2 实验方法 | 第96-99页 |
·酵母基因组的提取 | 第96-97页 |
·酵母表达载体pPDIy-ER 和pBiPy-ER 的构建 | 第97页 |
·酵母的转化 | 第97-98页 |
·重组蛋白在酵母细胞中的诱导表达 | 第98页 |
·酵母蛋白的提取 | 第98-99页 |
·酵母重组蛋白的检测 | 第99页 |
·转LeHSP21.5 基因酵母的UPR 分析 | 第99页 |
3 结果与分析 | 第99-102页 |
·酵母表达载体pBiPy-LeHSP21.5 和pPDIy-LeHSP21.5 的构建 | 第99-100页 |
·外源蛋白的Western 分析 | 第100-101页 |
·转LeHSP21.5 基因酵母的衣霉素抗性分析 | 第101-102页 |
4 讨论 | 第102-104页 |
参考文献 | 第104-120页 |
攻读博士学位期间整理发表的论文 | 第120-121页 |
致谢 | 第121-122页 |
图版 | 第122-125页 |