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过量表达LeHSP21.5减缓番茄的UPR应答并增强其耐逆性

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-12页
英文缩略表第12-14页
第一部分 文献综述第14-39页
 1 热激蛋白与分子伴侣第14-18页
   ·植物HSPs 的种类、功能和胁迫表达第14-16页
   ·植物sHSPs 的分类第16页
   ·植物sHSPs 的表达第16页
   ·植物sHSPs 的功能第16-17页
   ·植物HSPs 研究存在的问题与展望第17-18页
 2 内质网分子伴侣与胁迫第18-32页
   ·内质网分子伴侣第18-22页
   ·内质网胁迫(ER stress)第22页
   ·未折叠蛋白应答(unfold protein response, UPR)第22-29页
   ·ER stress 与程序性细胞死亡(programmed cell death, PCD)第29-31页
   ·UPR 研究存在问题与展望第31-32页
 3 植物的低温胁迫耐受机制第32-35页
   ·低温伤害(冷害)第32页
   ·植物耐冷机制第32-35页
   ·提高植物抗寒性存在的问题与展望第35页
 4 植物盐胁迫耐受机制第35-39页
   ·渗透稳态的维持第35-36页
   ·晚期胚胎发生富集蛋白(LEA 蛋白)与耐盐胁迫第36页
   ·盐胁迫下离子稳态的维持第36-37页
   ·SOS 信号通路第37-38页
   ·去除毒害第38页
   ·提高植物耐盐性存在的问题与展望第38-39页
第二部分 实验论文第39-104页
 第一章 LeHSP21.5 的分子生物学特性分析第39-58页
  1 实验材料第39-40页
  2 实验方法第40-51页
   ·质粒的提取第40-41页
   ·质粒的纯化、酶切和连接第41-42页
   ·质粒的转化第42-43页
   ·番茄LeHSP21.5 基因的分子克隆第43页
   ·番茄LeHSP21.5 基因的Southern 分析第43-46页
   ·番茄植株生长与热激等胁迫处理第46页
   ·番茄LeHSP21.5 基因的Northern 分析第46-47页
   ·番茄LeHSP21.5 蛋白的Western 分析第47-50页
   ·LeHSP21.5 蛋白的亚细胞定位分析第50-51页
  3 实验结果第51-56页
   ·LeHSP21.5 系统进化分析第51-52页
   ·LeHSP21.5 基因在番茄基因组中的Southern 杂交分析第52页
   ·LeHSP21.5 基因的表达特性第52-53页
   ·LeHSP21.5 蛋白的热诱导表达分析第53-55页
   ·LeHSP21.5 蛋白的膜微囊泡定位分析第55-56页
  4、讨论第56-58页
   ·LeHSP21.5 基因的热诱导表达特征第56-57页
   ·LeHSP21.5 为内质网定位的小分子热激蛋白第57-58页
 第二章 转LeHSP21.5 基因番茄植株的获得及UPR 分析第58-70页
  1 实验材料第58页
  2 实验方法第58-62页
   ·植物表达载体的构建第58页
   ·植物表达载体的农杆菌转化第58-59页
   ·番茄的培养与转化第59-60页
   ·转基因番茄的遗传学分析第60页
   ·转基因番茄的PCR 分析第60页
   ·转基因番茄的Southern 分析第60页
   ·转基因番茄的Northern 分析第60页
   ·转基因番茄的Western 分析第60页
   ·转基因番茄的DTT 抗性分析第60-61页
   ·转基因番茄的衣霉素抗性分析第61-62页
  3 实验结果第62-68页
   ·LeHSP21.5 基因过量表达载体的构建以及番茄的转化第62页
   ·转LeHSP21.5 基因番茄的PCR 鉴定和遗传学分析第62-63页
   ·转LeHSP21.5 基因番茄的分子鉴定第63-65页
   ·过量表达LeHSP21.5 增强番茄的DTT 抗性第65页
   ·过量表达LeHSP21.5 减缓DTT 处理下Calnexin 的表达第65-66页
   ·过量表达LeHSP21.5 增强番茄的衣霉素抗性第66-67页
   ·过量表达LeHSP21.5 减缓了衣霉素诱导的UPR第67-68页
  4 讨论第68-70页
 第三章 转LeHSP21.5 基因番茄植株的耐温度胁迫分析第70-85页
  1 实验材料第70页
  2 实验方法第70-73页
   ·番茄的耐热性分析第70页
   ·番茄的耐冷性分析第70页
   ·基本生理指标的测定第70-73页
   ·果实耐冷藏指标的测定第73页
   ·低温胁迫下植物的Northern 分析第73页
  3、结果与分析第73-81页
   ·过量表达LeHSP21.5 对植物耐热性的影响第73页
   ·过量表达LeHSP21.5 提高番茄植株的耐冷性第73-78页
   ·过量表达LeHSP21.5 提高番茄果实的耐冷藏性第78-79页
   ·过量表达LeHSP21.5 减缓了低温下番茄中的UPR 应答第79-81页
  4 讨论第81-85页
   ·过量表达LeHSP21.5 增强转基因番茄的耐冷性第81-82页
   ·转LeHSP21.5 基因番茄耐冷机制的探讨第82-83页
   ·过量表达LeHSP21.5 蛋白没有增强番茄的耐热能力第83-85页
 第四章 转LeHSP21.5 基因番茄的耐盐性分析第85-96页
  1 实验材料第85页
  2 实验方法第85-86页
   ·番茄的盐胁迫处理第85页
   ·基本生理指标的测定第85-86页
   ·盐胁迫下植物的Northern 和Western 分析第86页
  3 结果与分析第86-93页
   ·盐胁迫下转LeHSP21.5 基因植株的表型第86页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株鲜、干重和相对含水量的影响第86-87页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株体内Na~+、K~+、Ca~(2+)含量及K~+/Na~+比的影响第87-88页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株体内脯氨酸和可溶性糖含量的影响第88-89页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株MDA 含量和相对电导率的影响第89-90页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株体内SOD 酶活的影响第90-91页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株叶绿素含量的影响第91页
   ·盐胁迫对转基因与对照植株叶片光合速率、细胞间隙CO_2 的浓度和气孔导度的影响第91页
   ·盐胁迫对转基因植株与对照植株最大光化学效率PSⅡ的影响第91-92页
   ·过量表达LeHSP21.5 减缓了盐胁迫下番茄中的UPR 应答第92-93页
  4 讨论第93-96页
   ·过量表达LeHSP21.5 减轻了盐胁迫造成的ER stress第93-94页
   ·过量表达LeHSP21.5 增强转基因番茄耐盐性机理的探讨第94-96页
 第五章 过量表达LeHSP21.5 减缓UPR 机理的初步探讨第96-104页
  1 实验材料第96页
  2 实验方法第96-99页
   ·酵母基因组的提取第96-97页
   ·酵母表达载体pPDIy-ER 和pBiPy-ER 的构建第97页
   ·酵母的转化第97-98页
   ·重组蛋白在酵母细胞中的诱导表达第98页
   ·酵母蛋白的提取第98-99页
   ·酵母重组蛋白的检测第99页
   ·转LeHSP21.5 基因酵母的UPR 分析第99页
  3 结果与分析第99-102页
   ·酵母表达载体pBiPy-LeHSP21.5 和pPDIy-LeHSP21.5 的构建第99-100页
   ·外源蛋白的Western 分析第100-101页
   ·转LeHSP21.5 基因酵母的衣霉素抗性分析第101-102页
  4 讨论第102-104页
参考文献第104-120页
攻读博士学位期间整理发表的论文第120-121页
致谢第121-122页
图版第122-125页

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