| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-28页 |
| 1．1 手性化合物的重要性和研究现状 | 第9-11页 |
| 1．1．1 手性化合物的重要性消旋体拆分 | 第9-10页 |
| 1．1．2 手性技术的研究现状 | 第10-11页 |
| 1．2 手性技术 | 第11-13页 |
| 1．2．1 手性源 | 第11-12页 |
| 1．2．2 消旋体拆分 | 第12-13页 |
| 1．2．3 不对称合成 | 第13页 |
| 1．3 生物催化 | 第13-16页 |
| 1．3．1 生物催化的主要方式 | 第14页 |
| 1．3．2 生物催化生产手性化合物应用例 | 第14-16页 |
| 1．3．2．1 微生物或酶的手性拆分 | 第14-15页 |
| 1．3．2．2 生物催化不对称合成 | 第15-16页 |
| 1．4 COBE和CHBE | 第16-18页 |
| 1．4．1 4-氯乙酰乙酸乙酯 | 第16-17页 |
| 1．4．2 4-氯-3-羟基丁酸乙酯 | 第17页 |
| 1．4．3 (R)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯 | 第17-18页 |
| 1．5 微生物转化生产(R)-CHBE | 第18-20页 |
| 1．5．1 微生物还原羰基的原理 | 第18-19页 |
| 1．5．2 微生物转化COBE为(R)-CHBE | 第19-20页 |
| 1．6 辅酶再生 | 第20-25页 |
| 1．6．1 辅酶再生研究的重要性 | 第20页 |
| 1．6．2 辅酶再生的电化学法 | 第20-22页 |
| 1．6．3 辅酶再生的酶法 | 第22-25页 |
| 1．6．3．1 游离辅酶再生系统 | 第22-24页 |
| 1．6．3．2 细胞内再生系统 | 第24-25页 |
| 1．7 影响微生物转化的因素 | 第25-27页 |
| 1．7．1 底物添加方法的影响 | 第25页 |
| 1．7．2 酶诱导剂的影响 | 第25-26页 |
| 1．7．3 酶的抑制剂的影响 | 第26页 |
| 1．7．4 反应体系得影响 | 第26-27页 |
| 1．8 本课题拟研究的内容 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-33页 |
| 2．1 实验材料 | 第28页 |
| 2．1．1 质粒 | 第28页 |
| 2．1．2 菌株 | 第28页 |
| 2．1．3 工具酶和试剂盒 | 第28页 |
| 2．1．4 培养基 | 第28页 |
| 2．1．5 实验主要仪器 | 第28页 |
| 2．2 实验及分析 | 第28-33页 |
| 2．2．1 培养方法 | 第28-29页 |
| 2．2．2 粗酶液的制备 | 第29页 |
| 2．2．3 酶活的测定 | 第29-30页 |
| 2．2．4 催化还原反应 | 第30页 |
| 2．2．5 细胞生长测定 | 第30页 |
| 2．2．6 蛋白浓度测定 | 第30-31页 |
| 2．2．7 气/液相色谱测定底物和产物及e．e．值计算 | 第31-32页 |
| 2．2．8 数据处理方法 | 第32-33页 |
| 第三章 克隆、表达载体的构建及表达条件的优化 | 第33-44页 |
| 3．1 引言 | 第33-34页 |
| 3．2 材料与方法 | 第34-38页 |
| 3．2．1 质粒 | 第34-35页 |
| 3．2．2 菌种 | 第35页 |
| 3．2．3 培养基 | 第35页 |
| 3．2．4 工具酶和试剂盒 | 第35-36页 |
| 3．2．5 质粒抽提 | 第36页 |
| 3．2．6 感受态细胞的制备和质粒转化 | 第36页 |
| 3．2．7 DNA的检测 | 第36页 |
| 3．2．8 克隆载体和表达载体的构建 | 第36-38页 |
| 3．2．8．1 PCR扩增 | 第36-38页 |
| 3．2．8．2 表达载体pQE30-ALRgdh223的构建 | 第38页 |
| 3．3 结果和讨论 | 第38-43页 |
| 3．3．1 培养基的选择 | 第39-40页 |
| 3．3．2 培养温度的选择 | 第40页 |
| 3．3．3 诱导剂加入时间 | 第40-41页 |
| 3．3．4 诱导温度 | 第41页 |
| 3．3．5 诱导剂IPTG的量 | 第41-42页 |
| 3．3．6 诱导时间 | 第42-43页 |
| 3．4 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 重组菌不对称还原制备(R)-CHBE | 第44-56页 |
| 4．1 引言 | 第44页 |
| 4．2 材料与方法 | 第44-45页 |
| 4．2．1 菌种 | 第44页 |
| 4．2．2 培养基及培养方法 | 第44-45页 |
| 4．2．3 不对称还原反应体系 | 第45页 |
| 4．2．4 气相和液相色谱检测 | 第45页 |
| 4．3 结果与讨论 | 第45-54页 |
| 4．3．1 反应体系的pH值 | 第45-46页 |
| 4．3．2 转化温度 | 第46-47页 |
| 4．3．3 葡萄糖浓度 | 第47页 |
| 4．3．4 底物浓度 | 第47-48页 |
| 4．3．5 采用底物分批加入的方式 | 第48-49页 |
| 4．3．6 不同菌株催化还原 COBE为(R)-CHBE的比较 | 第49-50页 |
| 4．3．7 两种不同转化体系的比较 | 第50-51页 |
| 4．3．8 两相体系转化COBE的研究 | 第51-54页 |
| 4．3．8．1 不同有机溶剂对产物得率的影响 | 第51-52页 |
| 4．3．8．2 水相与有机相体积比对产物的影响 | 第52-53页 |
| 4．3．8．3 转速对产率的影响 | 第53-54页 |
| 4．4 小结 | 第54-56页 |
| 第五章 两相体系中双重组菌耦合不对称催化还原制备(R)-CHBE | 第56-66页 |
| 5．1 引言 | 第56-57页 |
| 5．2 材料与方法 | 第57-60页 |
| 5．2．1 材料 | 第57-58页 |
| 5．2．1．1 试剂 | 第57页 |
| 5．2．1．2 菌种 | 第57-58页 |
| 5．2．1．3 培养基 | 第58页 |
| 5．2．2 方法 | 第58-60页 |
| 5．2．2．1 菌体培养方法 | 第58页 |
| 5．2．2．2 还原方法 | 第58页 |
| 5．2．2．3 酶活检测方法 | 第58-60页 |
| 5．2．2．3．1 ALR的酶活测定 | 第58页 |
| 5．2．2．3．2 gdh223的酶活测定 | 第58-60页 |
| 5．3 结果和讨论 | 第60-65页 |
| 5．3．1 水相和有机相/水相两相体系的比较 | 第60-62页 |
| 5．3．2 葡萄糖浓度对产物得率的影响 | 第62-63页 |
| 5．3．3 水相与有机相体积比例对产物得率的影响 | 第63页 |
| 5．3．4 乙酸正丁酯/磷酸钾缓冲液两相体系中转化COBE的研究 | 第63-65页 |
| 5．4 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 课题总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
