| 第一章 文献综述 | 第1-19页 |
| 第二章 气单胞菌安徽分离株的鉴定 | 第19-28页 |
| 引言 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-23页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| ·分离菌株的来源 | 第20页 |
| ·主要培养基与编码鉴定试剂盒 | 第20页 |
| ·诊断试剂 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-23页 |
| ·气单胞菌安徽分离株的鉴定 | 第21-22页 |
| ·细菌的初步鉴定 | 第21-22页 |
| ·细菌的数值鉴定 | 第22页 |
| ·气单胞菌安徽分离株的人工感染试验 | 第22-23页 |
| ·细菌培养与菌液配制 | 第22页 |
| ·人工感染小鼠试验 | 第22页 |
| ·人工感染水产动物试验 | 第22-23页 |
| 结果与分析 | 第23-26页 |
| 1 细菌的初步鉴定结果 | 第23-25页 |
| 2 细菌的数值鉴定结果 | 第25页 |
| 3 气单胞菌安徽分离株的致病性 | 第25-26页 |
| 讨论 | 第26-28页 |
| 1 细菌数值鉴定法的原理、应用及其影响因素 | 第26-27页 |
| 2 气单胞菌安徽分离株的表型种分布与致病性 | 第27-28页 |
| 第三章 气单胞菌 MPCR 检测方法建立与安徽分离株毒力基因型分布 | 第28-46页 |
| 引言 | 第28-29页 |
| 材料与方法 | 第29-36页 |
| 1 材料 | 第29-30页 |
| ·实验菌株 | 第29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-36页 |
| ·多重PCR 检测方法的建立 | 第30-36页 |
| ·细菌培养与基因组DNA 提取 | 第30-31页 |
| ·引物设计与合成 | 第31页 |
| ·多重PCR 条件的优化 | 第31-33页 |
| ·多重PCR 产物的鉴定 | 第33-35页 |
| ·多重PCR 的特异性试验 | 第35页 |
| ·多重PCR 的敏感性试验 | 第35-36页 |
| ·气单胞菌安徽分离株的毒力基因检测 | 第36页 |
| 结果与分析 | 第36-43页 |
| 1 多重PCR 条件的优化 | 第36-40页 |
| ·引物浓度组合比的优化 | 第36页 |
| ·镁离子浓度的优化 | 第36-37页 |
| ·Taq 酶量的优化 | 第37-38页 |
| ·模板提取方法的优化 | 第38页 |
| ·退火温度的优化 | 第38-39页 |
| ·延伸时间的优化 | 第39-40页 |
| ·循环次数的优化 | 第40页 |
| 2 多重PCR 产物的鉴定 | 第40-41页 |
| 3 多重PCR 的特异性 | 第41页 |
| 4 多重PCR 的敏感性 | 第41-42页 |
| 5 气单胞菌安徽分离株的毒力基因型分布 | 第42-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 1 多重PCR 技术的原理、应用与条件优化 | 第43-44页 |
| 2 气单胞菌安徽分离株的毒力基因型分布 | 第44-46页 |
| 第四章 气单胞菌安徽分离株毒力基因的克隆与序列分析 | 第46-66页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 材料与方法 | 第47-53页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| ·实验菌株 | 第47页 |
| ·工程菌与质粒 | 第47-48页 |
| ·酶类与其他试剂 | 第48页 |
| ·培养基与常用溶液 | 第48-49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| 2 方法 | 第49-53页 |
| ·细菌的培养与基因组DNA 提取 | 第49页 |
| ·引物设计与合成 | 第49-50页 |
| ·毒力基因的PCR 扩增 | 第50页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第50页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第50-52页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第51页 |
| ·连接产物的转化 | 第51页 |
| ·可疑重组菌的筛选与鉴定 | 第51-52页 |
| ·毒力基因序列测定 | 第52页 |
| ·毒力基因核苷酸、氨基酸序列的比较分析及系统发生树构建 | 第52-53页 |
| 结果与分析 | 第53-63页 |
| 1 毒力基因的PCR 扩增结果 | 第53-54页 |
| ·aha1 基因的PCR 扩增 | 第53页 |
| ·hly 基因的PCR 扩增 | 第53-54页 |
| ·alt 基因的PCR 扩增 | 第54页 |
| 2 毒力基因的克隆与鉴定 | 第54-56页 |
| ·aha1 基因的克隆与鉴定 | 第54页 |
| ·hly 基因的克隆与鉴定 | 第54-55页 |
| ·alt 基因的克隆与鉴定 | 第55-56页 |
| 3 毒力基因序列测定结果与联机检索 | 第56-58页 |
| ·毒力基因aha1 序列测定结果与联机检索 | 第56-57页 |
| ·毒力基因hly 序列测定结果与联机检索 | 第57页 |
| ·毒力基因alt 序列测定结果与联机检索 | 第57-58页 |
| 4 毒力基因核苷酸序列与推导氨基酸序列的比较分析 | 第58-61页 |
| ·aha1 基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第58-59页 |
| ·hly 基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第59-60页 |
| ·alt 基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第60-61页 |
| 5 毒力基因的系统发生树分析 | 第61-63页 |
| ·aha1 基因的系统发生树分析 | 第61页 |
| ·hly 基因的系统发生树分析 | 第61页 |
| ·alt 基因的系统发生树分析 | 第61-63页 |
| 讨论 | 第63-66页 |
| 1 气单胞菌毒力基因的克隆测序 | 第63页 |
| 2 气单胞菌毒力基因的同源性与系统发生树分析 | 第63-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 附录 | 第70-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
