牛分枝杆菌MPB64基因的克隆与原核表达
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 第一部分 前言 | 第12-20页 |
| 一 结核病流行概况 | 第12-13页 |
| 二 病原及流行病学 | 第13-14页 |
| 三 致病机理研究 | 第14-15页 |
| 四 免疫机理研究 | 第15页 |
| 五 牛结核诊断的研究进展 | 第15-17页 |
| 六 防制 | 第17-18页 |
| 七 结核杆菌核酸疫苗研究进展 | 第18-19页 |
| 八 目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 实验内容 | 第20-42页 |
| 实验一 牛分枝杆菌MPB64基因的克隆与序列分析 | 第20-33页 |
| 1 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·菌株 | 第20-21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·培养基的配制 | 第21页 |
| ·溶液的配制 | 第21-22页 |
| ·染色体DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·引物的设计 | 第23页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第23-24页 |
| ·MPB64基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·测序鉴定 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-32页 |
| ·牛分枝杆菌的培养 | 第27页 |
| ·牛分枝杆菌染色体DNA的提取 | 第27页 |
| ·牛分枝杆菌MPB64基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·目的片段的回收纯化 | 第28-29页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第29-31页 |
| ·序列测定结果 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| ·关于DNA聚合酶的选择 | 第32页 |
| ·关于限制性内切酶的选择 | 第32页 |
| ·关于基因的克隆 | 第32-33页 |
| 实验二 牛分枝杆菌MPB64基因的表达与免疫检测 | 第33-42页 |
| 1 材料与方法 | 第33-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第33-34页 |
| ·Western-blot印迹试剂 | 第34页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·MPB64基因表达产物的检测 | 第36-37页 |
| 2 结果 | 第37-40页 |
| ·重组表达载体pET28a-64的筛选 | 第37-38页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第38-39页 |
| ·MPB64重组蛋白的表达 | 第39-40页 |
| ·蛋白质印迹分析 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| ·MPB64基因在大肠杆菌中表达的意义 | 第40-41页 |
| ·关于免疫印迹 | 第41-42页 |
| 第三部分 结论 | 第42-43页 |
| 第四部分 参考文献 | 第43-47页 |
| 第五部分 致谢 | 第47页 |
