| 中文摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-17页 |
| 英文缩写说明 | 第17-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-36页 |
| 第一节 BLyS研究进展 | 第19-27页 |
| 1. BLyS的结构、表达调控及受体 | 第19-21页 |
| ·结构 | 第19页 |
| ·表达调控 | 第19-20页 |
| ·受体 | 第20-21页 |
| 2. BLyS的生物学功能 | 第21-22页 |
| ·对 B淋巴细胞的作用 | 第21-22页 |
| ·对 T淋巴细胞的作用 | 第22页 |
| 3. 信号通路 | 第22-23页 |
| 4. BLyS与疾病的关系 | 第23-26页 |
| ·BLyS与自身免疫病 | 第23-24页 |
| ·BLyS与癌症 | 第24-25页 |
| ·BLyS与感染 | 第25-26页 |
| 5. 治疗策略 | 第26-27页 |
| 第二节 噬菌体展示技术的研究进展 | 第27-36页 |
| 1. 噬菌体展示技术的基本原理 | 第27页 |
| 2. 筛选技术 | 第27-29页 |
| 3. 噬菌体展示系统 | 第29-33页 |
| ·丝状噬菌体展示系统 | 第29-32页 |
| ·λ噬菌体展示系统 | 第32-33页 |
| ·T4噬菌体展示系统 | 第33页 |
| ·T7噬菌体展示系统 | 第33页 |
| 4. 噬菌体展示系统应用 | 第33-35页 |
| ·抗原表位分析 | 第33-34页 |
| ·蛋白质之间相互作用位点分析 | 第34页 |
| ·研制人源性抗体 | 第34页 |
| ·药物设计和疫苗开发 | 第34-35页 |
| 5. 前景与展望 | 第35-36页 |
| 第二章 BLyS_(134-285)对噬菌体随机12肽库的筛选 | 第36-60页 |
| ·实验材料 | 第37-41页 |
| ·菌株、质粒、文库和实验动物 | 第37页 |
| ·抗体 | 第37页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第37-38页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第38-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·质粒 DNA小量快速抽提 | 第41页 |
| ·质粒 DNA的酶切与连接 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第42页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·质粒 DNA及连接产物的转化 | 第42页 |
| ·DNA片段的回收 | 第42-43页 |
| ·重组子在大肠杆菌的表达 | 第43页 |
| ·Ni-NTA树脂亲和纯化蛋白质 | 第43页 |
| ·蛋白质浓度测定 | 第43-44页 |
| ·小鼠脾脏 B淋巴细胞分离及 MTT检测 | 第44-45页 |
| ·尼龙棉柱的制备 | 第44页 |
| ·分离小鼠脾脏 B细胞 | 第44-45页 |
| ·MTT检测 | 第45页 |
| ·对噬菌体随机12肽库的筛选 | 第45-47页 |
| ·淘洗 | 第45-46页 |
| ·噬菌体的滴度测定 | 第46页 |
| ·噬菌体的扩增和纯化 | 第46-47页 |
| ·ELISA鉴定噬菌体克隆的结合活性 | 第47页 |
| ·噬菌体克隆的竞争 ELISA | 第47-48页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-57页 |
| ·BLyS_(134-285)的表达与纯化 | 第48-50页 |
| ·BLyS_(134-285)的表达 | 第48-49页 |
| ·BLyS_(134-285)的纯化 | 第49-50页 |
| ·MTT测定 BLyS_(134-285)活性 | 第50页 |
| ·BLyS_(134-285)对噬菌体12肽库的筛选 | 第50-53页 |
| ·淘洗 | 第50-51页 |
| ·Phage-ELISA | 第51页 |
| ·噬菌体克隆的 DNA测序及展示肽段的序列分析 | 第51-53页 |
| ·噬菌体克隆的竞争 ELISA | 第53页 |
| ·GST-T1重组质粒的构建 | 第53-55页 |
| ·GST融合小肽在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第55-56页 |
| ·GST融合小肽的表达 | 第55页 |
| ·GST融合小肽的纯化 | 第55-56页 |
| ·ELISA检测 GST-T1与BLyS_(134-285)的结合 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 第三章 BCMA突变体的研究 | 第60-72页 |
| ·实验材料 | 第60页 |
| ·质粒、抗体 | 第60页 |
| ·溶液 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-62页 |
| ·质粒提取、酶切、连接、转化以及重组子在大肠杆菌的表达 | 第61页 |
| ·Fc融合蛋白的纯化 | 第61页 |
| ·Over-lap PCR介导定点突变 | 第61-62页 |
| ·Western blot | 第62页 |
| ·ELISA比较各突变体与BLyS_(134-285)的结合活性 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-70页 |
| ·突变位点的确立 | 第62-63页 |
| ·引物设计 | 第63页 |
| ·pT7Fc1-mBCMA的构建 | 第63-68页 |
| ·mBCMA的 DNA扩增 | 第63-65页 |
| ·pT7Fc1-mBCMA的构建 | 第65-68页 |
| ·mBCMA在大肠杆菌的可溶表达与纯化 | 第68-69页 |
| ·mBCMA的可溶表达 | 第68页 |
| ·mBCMA的纯化 | 第68-69页 |
| ·mBCMA与BLyS_(134-285)结合活性的比较 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 噬菌体展示单链抗体在Western blot中的应用 | 第72-80页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-75页 |
| ·辅助噬菌体 VCSM13的扩增 | 第73-74页 |
| ·对scFv噬菌体库的淘洗 | 第74页 |
| ·噬菌体滴度测试 | 第74页 |
| ·噬菌体扩增与纯化 | 第74页 |
| ·ELISA鉴定噬菌体克隆的结合活性 | 第74-75页 |
| ·ELISA测定噬菌体克隆亲和力 | 第75页 |
| ·噬菌体-Western blot | 第75页 |
| ·实验结果 | 第75-79页 |
| ·噬菌体展示scFv文库的淘洗 | 第75-76页 |
| ·噬菌体克隆的鉴定 | 第76-77页 |
| ·B16与 BLyS_(134-285)及 F1与 FP248结合力比较 | 第77页 |
| ·噬菌体-Western blot | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 发表文章 | 第89页 |
