| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 第一章 查尔酮合酶基因研究进展及其在植物花色改良中的应用 | 第12-37页 |
| 1 查尔酮合酶基因简介及研究蝴蝶兰查尔酮合酶基因的意义 | 第12-13页 |
| 2 植物查尔酮合酶的功能 | 第13-18页 |
| ·查尔酮合酶是花色素合成的关键酶 | 第13-17页 |
| ·查尔酮合酶在植物防御反应中的作用 | 第17-18页 |
| 3 查尔酮合酶基因家族成员的分子进化及其多样性表达的调控 | 第18-21页 |
| ·查尔酮合酶在多数植物中由多基因家族编码 | 第18页 |
| ·查尔酮合酶基因家族成员的特异性表达 | 第18-19页 |
| ·查尔酮合酶基因家族成员的进化及其与特异性表达的关系 | 第19-20页 |
| ·查尔酮合酶基因超家族成员简介 | 第20-21页 |
| 4.查尔酮合酶基因表达调控的顺式作用元件和反式作用因子 | 第21-23页 |
| ·ACE元件 | 第22页 |
| ·H-box | 第22页 |
| ·Anther-box | 第22-23页 |
| ·TACPyAT序列 | 第23页 |
| ·Myb类转录因子 | 第23页 |
| 5 查尔酮合酶基因在基因工程花色改良和转基因反义抑制研究中的应用 | 第23-25页 |
| ·直接导入色素合成的有关基因以诱导色素合成 | 第24页 |
| ·利用反义RNA技术抑制花色素合成酶基因的表达 | 第24-25页 |
| 6.蝴蝶兰查尔酮合酶基因的研究现状及其研究意义 | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-36页 |
| 研究思路和技术路线 | 第36-37页 |
| 第二章 蝴蝶兰查尔酮合酶基因家族成员的克隆和序列分析 | 第37-62页 |
| 1 材料与试剂 | 第37-40页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·细菌载体与主要试剂 | 第37-38页 |
| ·PCR引物序列 | 第38-40页 |
| ·用于扩增phchs3的引物 | 第38页 |
| ·用于扩增phchs4的引物 | 第38-39页 |
| ·用于扩增phchs5的引物 | 第39-40页 |
| ·主要的仪器设备 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-49页 |
| ·蝴蝶兰花苞总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·RNA提取过程中的注意事项 | 第40-41页 |
| ·提取方法 | 第41页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第41页 |
| ·RT-PCR扩增phchs3和phchs5 cDNA片段 | 第41-42页 |
| ·蝴蝶兰基因组DNA的抽提 | 第42页 |
| ·SDS抽提缓冲液的配制 | 第42页 |
| ·抽提方法 | 第42页 |
| ·PCR扩增phchs4基因片段 | 第42-43页 |
| ·反式PCR方法扩增CHS基因上下游序列 | 第43-44页 |
| ·酶切基因组DNA | 第43页 |
| ·酶切产物的自连 | 第43页 |
| ·反式PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·PCR产物的T-A克隆 | 第44页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第45页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量提取 | 第45-46页 |
| ·DNA序列测定及序列分析 | 第46页 |
| ·Southern杂交 | 第46-49页 |
| ·限制性内切酶消化DNA以及DNA片段的电泳分离 | 第46页 |
| ·限制性酶切片段的转移和DNA在膜上的固定 | 第46-47页 |
| ·探针的标记 | 第47-48页 |
| ·预杂交、杂交和洗膜 | 第48页 |
| ·膜的封闭、抗体孵育和膜的洗涤 | 第48页 |
| ·信号检测 | 第48-49页 |
| 3 结果和讨论 | 第49-61页 |
| ·phchs3基因的克隆和序列分析 | 第49-52页 |
| ·phchs4基因的克隆和序列分析 | 第52-57页 |
| ·phchs5基因的克隆和序列分析 | 第57-60页 |
| ·蝴蝶兰查尔酮合酶由多基因家族编码 | 第60-61页 |
| 4.小结 | 第61-62页 |
| 第三章 蝴蝶兰查尔酮合酶基因的进化分析以及兰科植物查尔酮合酶基因分子进化的机制 | 第62-71页 |
| 1.材料和方法 | 第62-64页 |
| ·用于研究分析的DNA序列来源 | 第62-63页 |
| ·序列的同源性比较和进化树的构建 | 第63页 |
| ·相对速率检验 | 第63-64页 |
| 2.结果和讨论 | 第64-70页 |
| ·蝴蝶兰phchs3、phchs4和phchs5核苷酸序列的比较 | 第64-65页 |
| ·蝴蝶兰(兰科植物)CHS基因的复制和分歧 | 第65-67页 |
| ·蝴蝶兰(兰科植物)查尔酮合酶基因的异质性(heterogeneous)进化 | 第67-69页 |
| ·分子钟检测与兰科CHS亚家族(Orchid CHS groups)的进化速率 | 第69-70页 |
| 3.小结 | 第70-71页 |
| 第四章 蝴蝶兰查尔酮合酶基因家族成员的差异表达调控 | 第71-81页 |
| 1.材料和试剂 | 第71-72页 |
| ·植物材料 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-72页 |
| ·半定量RT-PCR引物序列 | 第72页 |
| 2.方法 | 第72-74页 |
| ·蝴蝶兰组织总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第72页 |
| ·半定量RT-PCR | 第72-73页 |
| ·以actin转录物的扩增量对cDNA相对定量 | 第72-73页 |
| ·RT-PCR反应扩增目的基因 | 第73页 |
| ·phchs5全长基因转录的鉴定 | 第73-74页 |
| 3.结果和讨论 | 第74-81页 |
| ·蝴蝶兰花器官和发育阶段的划分 | 第74页 |
| ·蝴蝶兰CHS基因的组织和发育特异性表达 | 第74-76页 |
| ·Phchs5在不同蝴蝶兰花色品种中的表达 | 第76-78页 |
| ·对phchs5全长基因转录情况的鉴定 | 第78-81页 |
| 第五章 蝴蝶兰查尔酮合酶基因phchs3 cDNA片段的原核表达与真核表达 | 第81-93页 |
| 1.材料 | 第81-82页 |
| ·植物材料 | 第81页 |
| ·细菌载体与主要试剂 | 第81-82页 |
| ·主要的仪器设备 | 第82页 |
| 2.方法 | 第82-88页 |
| ·phchs3-1的克隆(第二章2.1至2.3) | 第82页 |
| ·phchs3-1的原核表达 | 第82-84页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第82-83页 |
| ·目的基因的诱导表达和SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳 | 第83-84页 |
| ·phchs3-1在烟草中的表达 | 第84-88页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第84-85页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第85页 |
| ·农杆菌的转化 | 第85页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第85-86页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第86页 |
| ·农杆菌的培养 | 第86页 |
| ·烟草的转化 | 第86页 |
| ·转基因烟草的鉴定 | 第86-88页 |
| ·以PCR方法对转基因烟草进行初步鉴定 | 第87页 |
| ·转基因烟草的Southern杂交鉴定 | 第87页 |
| ·烟草基因组DNA的提取、限制性内切酶酶切以及DNA片段的电泳分离 | 第87页 |
| ·DNA片段向尼龙膜的转移、固定、Southern杂交和信号检测 | 第87页 |
| ·外源基因在转基因烟草中的表达 | 第87-88页 |
| 3.结果和讨论 | 第88-92页 |
| ·phchs3-1的序列分析 | 第88-89页 |
| ·Phchs3-1的原核表达 | 第89页 |
| ·转基因烟草 | 第89-92页 |
| 4 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 发表的论文 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
