| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-10页 |
| 第一部分 前言 | 第10-50页 |
| 一、丙型肝炎病毒的基因组结构及功能 | 第10-20页 |
| (一)HCV蛋白的翻译、加工及其功能 | 第11-15页 |
| (二)HCV复制 | 第15-17页 |
| (三)病毒颗粒的生活周期 | 第17-20页 |
| 二、HCv逃避宿主细胞内的防御机制 | 第20-24页 |
| (一)、宿主抗感染的反应 | 第20-21页 |
| (二)、控制和逃避宿主反应 | 第21-24页 |
| 1.利用病毒蛋白控制和逃避宿主反应 | 第21-23页 |
| 2.病毒突变与宿主反应 | 第23-24页 |
| 三、HCV的治疗 | 第24-27页 |
| (一)、干扰素基础上的治疗 | 第24页 |
| (二)、以分子为基础的治疗策略 | 第24-27页 |
| 1.HCV蛋白酶抑制剂 | 第24-25页 |
| 2.反义核昔酸 | 第25页 |
| 3.RNA干扰技术 | 第25-26页 |
| 4.核酶 | 第26页 |
| 5.分子治疗载体 | 第26-27页 |
| 四、丙型肝炎疫苗 | 第27-35页 |
| 五、HCV动物模型 | 第35-38页 |
| (一)、黑猩猩 | 第35页 |
| (二)、转基因小鼠 | 第35-36页 |
| (三)、携带人肝组织的转基因小鼠 | 第36-38页 |
| 六、展望 | 第38-39页 |
| 参考文献: | 第39-50页 |
| 第二部分 HCV多表位抗原基因pcx3的构建、表达和纯化 | 第50-65页 |
| 一、材料 | 第51页 |
| 二、试剂 | 第51页 |
| 三、方法 | 第51-55页 |
| 1 抽提质粒 | 第51-52页 |
| 2 pxc3基因的克隆以及重组表达载体的构建 | 第52-53页 |
| 3 目的基因的原核表达 | 第53页 |
| 4 目的基因的真核表达 | 第53-54页 |
| 5 目的蛋白的纯化及定量 | 第54页 |
| 6 蛋白质的复性 | 第54页 |
| 7 利用BCA法进行蛋白质定量:根据BCA蛋白质定量检测试剂(SK3021)操 作方法: | 第54页 |
| 8 EILSA检测多表位抗原与患者抗-HCV血清反应的特异性 | 第54-55页 |
| 9 Western blot检测多表位蛋白与抗-HCV抗体反应的特异性 | 第55页 |
| 四、结果 | 第55-62页 |
| 1 多表位抗原基因pcx3的表位组成及克隆 | 第55-58页 |
| 2 多表位抗原基因cPx3和pxc的表达与纯化 | 第58-59页 |
| 3 蛋白质浓度的测定 | 第59-60页 |
| 4 PCX3蛋白抗-HCV抗体反应的特异性 | 第60-62页 |
| 五、讨论 | 第62-65页 |
| 第三部分 HCV多表位基因工程抗原PCX3在小鼠体内免疫应答的研究 | 第65-78页 |
| 一、材料 | 第65页 |
| 1 试剂 | 第65页 |
| 2 多肤 | 第65页 |
| 3 动物 | 第65页 |
| 二、方法 | 第65-67页 |
| 1 免疫 | 第65-66页 |
| 2 特异性抗体的检测 | 第66页 |
| 3 细胞免疫的检测 | 第66-67页 |
| 4 安全性评价 | 第67页 |
| 5 统计学处理 | 第67页 |
| 三、结果 | 第67-75页 |
| 1 多表位抗原诱导的特异性体液免疫应答 | 第67-70页 |
| 2 CTL反应 | 第70页 |
| 3 淋巴细胞亚群分析 | 第70-72页 |
| 4 安全性评价 | 第72-75页 |
| 四、讨论 | 第75-78页 |
| 第四部分 HCV多表位抗原PCX3抗血清体外中和病毒的研究以及单克隆抗体的制备 | 第78-89页 |
| 一、材料 | 第78页 |
| 二、试剂 | 第78-79页 |
| 三、方法 | 第79-81页 |
| 1.Western blot | 第79页 |
| 2.抗血清体外结合病毒试验 | 第79-80页 |
| 3.抗血清抑制转基因小鼠体内HCV感染的实验 | 第80页 |
| 4.单克隆抗体的制备 | 第80-81页 |
| 四、结果 | 第81-86页 |
| 1.PCX3诱导的抗血清体外结合病毒粒子 | 第81-83页 |
| 2.PCX3诱导的抗血清能够在转基因小鼠模型中抑制HCV的感染 | 第83-84页 |
| 3.抗血清与HCV蛋白的特异性结合 | 第84-85页 |
| 4.抗HCV核心蛋白、包膜蛋白、NS3蛋白单克隆抗体的制备 | 第85-86页 |
| 五、讨论 | 第86-89页 |
| 第五部分 丙型肝炎病毒核心蛋白单链抗体基因的克隆及表达 | 第89-102页 |
| 一、材料 | 第90-92页 |
| 1 细胞株、菌株与质粒 | 第90页 |
| 2 试剂 | 第90页 |
| 3 仪器 | 第90-92页 |
| 二、方法 | 第92-96页 |
| (一)单克隆抗体可变区基因的克隆 | 第92-94页 |
| 1 小鼠杂交瘤细胞中抽提总RNA | 第92页 |
| 2 mRNA逆转录成cDNA | 第92-93页 |
| 3 扩增轻链、重链可变区cDNA | 第93页 |
| 4 PCR片段的纯化 | 第93页 |
| 5 连接pMD18-T载体 | 第93-94页 |
| 6 转化大肠杆菌DH5α | 第94页 |
| 7 转化子的筛选及测序 | 第94页 |
| (二)scFv的构建 | 第94-96页 |
| 1 设计引物并利用PCR连接重链与轻链可变区 | 第94-95页 |
| 2 PCR片段与pMD18-T载体的连接、转化及鉴定 | 第95页 |
| 3 连接pET19b+表达载体 | 第95页 |
| 4 选取阳性克隆进行小量表达 | 第95-96页 |
| 三、结果 | 第96-99页 |
| 1 重链与轻链可变区的基因克隆 | 第96-97页 |
| 2 重链与轻链可变区序列的测序 | 第97页 |
| 3 单链抗体基因的构建和表达 | 第97-99页 |
| 4 预测单链抗体的立体模型 | 第99页 |
| 四、讨论 | 第99-102页 |
| 小结 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-109页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-111页 |
| 博士生期间获奖与发表论文目录 | 第111-113页 |
