| 致谢 | 第1-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一部分 | 第11-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·NF-κB蛋白家族组成 | 第12-14页 |
| ·NF-κB的激活途径 | 第14-15页 |
| ·NF-κB调控的基因 | 第15页 |
| ·NF-κB的生物学功能 | 第15-19页 |
| ·NF-κB与细胞凋亡 | 第15-16页 |
| ·NF-κB与细胞周期 | 第16页 |
| ·NF-κB与免疫 | 第16-17页 |
| ·NF-κB与肿瘤 | 第17-19页 |
| ·NF-κB是一种新型抗肿瘤药物筛选的靶分子 | 第19页 |
| ·现有检测NF-κB活性的方法 | 第19-20页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第20-23页 |
| ·本实验的选题依据及目标 | 第20-21页 |
| ·本实验的主要内容 | 第21页 |
| ·本实验所要解决的关键性问题 | 第21-22页 |
| ·技术路线 | 第22-23页 |
| 第二部分 | 第23-47页 |
| 第三章 重组表达载体PGEX-4T-P50的构建 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-29页 |
| ·总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR反应 | 第25页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第25-26页 |
| ·低熔点胶回收PCR产物 | 第26-27页 |
| ·重组载体pGEX-4T-P50的制备 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27页 |
| ·E.coli TG1感受态细胞的制备(以下操作均在超净台上进行) | 第27-28页 |
| ·连接产物转化感受态细胞 | 第28页 |
| ·碱法小批量抽提质粒DNA | 第28-29页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-P50的双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-P50的PCR鉴定 | 第29页 |
| ·基因序列测定 | 第29页 |
| ·核酸电泳 | 第29页 |
| ·结果与分析 | 第29-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第29-30页 |
| ·质粒pGEX-4T-1的图谱 | 第30页 |
| ·重组载体构建策略 | 第30-31页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 融合蛋白的诱导表达、纯化及抗体制备 | 第34-40页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·试剂和缓冲液 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-37页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| ·抗体的制备 | 第35页 |
| ·抗体的纯化 | 第35页 |
| ·抗体的Western印迹分析(参照分子克隆实验指南) | 第35-36页 |
| ·抗体的ELISA检测 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-39页 |
| ·SDS-PAGE分析融合蛋白的表达及纯化 | 第37-38页 |
| ·抗体的Western印迹分析 | 第38页 |
| ·抗体的ELISA检测分析 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| 第五章 酶标检测方法的构建及验证 | 第40-47页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·培养基、试剂和缓冲液 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·U251细胞培养 | 第41页 |
| ·U251细胞冻存 | 第41页 |
| ·细胞处理及分组 | 第41页 |
| ·核蛋白的提取 | 第41-42页 |
| ·检测模型验证 | 第42页 |
| ·统计学处理 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-45页 |
| ·酶标方法原理图 | 第43页 |
| ·酶标方法的建立 | 第43-44页 |
| ·检测模型对其验证 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 附录 | 第49-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |