| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 内参基因 | 第12-16页 |
| 1.1.1 内参基因研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1.1 内参基因研究背景 | 第12-13页 |
| 1.1.1.2 内参基因研究动态 | 第13-14页 |
| 1.1.1.3 内参基因研究前景 | 第14-15页 |
| 1.1.2 内参基因筛选方法 | 第15-16页 |
| 1.2 MYB转录因子与非生物胁迫 | 第16-18页 |
| 1.2.1 MYB转录因子 | 第16页 |
| 1.2.2 MYB转录因子在非生物胁迫中的作用 | 第16-18页 |
| 1.3 酵母双杂交技术 | 第18-20页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术的原理 | 第18页 |
| 1.3.2 酵母双杂交技术的应用 | 第18-20页 |
| 1.3.2.1 研究蛋白质间的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.3.2.2 分析发病机理 | 第19页 |
| 1.3.2.3 筛选药物和寻找药物靶标 | 第19页 |
| 1.3.2.4 建立蛋白质相互作用图谱 | 第19-20页 |
| 1.4 四季秋海棠概述 | 第20页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 引言 | 第21-22页 |
| 3 四季秋海棠内参基因的筛选 | 第22-36页 |
| 3.1 试验材料 | 第22页 |
| 3.1.1 植物材料及处理 | 第22页 |
| 3.1.2 主要试验试剂 | 第22页 |
| 3.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 3.2.1 候选内参筛选和引物设计 | 第22-23页 |
| 3.2.2 总RNA提取和质量检测 | 第23页 |
| 3.2.3 反转录合成cDNA第一链 | 第23-24页 |
| 3.2.4 引物特异性验证 | 第24-25页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR | 第25页 |
| 3.2.6 内参基因稳定性验证 | 第25页 |
| 3.2.7 数据处理 | 第25页 |
| 3.3 结果与分析 | 第25-34页 |
| 3.3.1 内参基因引物的特异性分析 | 第25-26页 |
| 3.3.2 非生物胁迫组内参基因的筛选 | 第26-28页 |
| 3.3.2.1 非生物胁迫组内参基因的CT值分析 | 第26页 |
| 3.3.2.2 非生物胁迫组内参基因的稳定性评价 | 第26-28页 |
| 3.3.2.3 非生物胁迫组内参基因的稳定性验证 | 第28页 |
| 3.3.3 生物胁迫组内参基因的筛选 | 第28-31页 |
| 3.3.3.1 生物胁迫组内参基因的CT值分析 | 第28-29页 |
| 3.3.3.2 生物胁迫组内参基因的稳定性评价 | 第29-30页 |
| 3.3.3.3 生物胁迫组内参基因的稳定性验证 | 第30-31页 |
| 3.3.4 低温不同时段胁迫组内参基因的筛选 | 第31-34页 |
| 3.3.4.1 低温不同时段胁迫组内参基因的CT值分析 | 第31-32页 |
| 3.3.4.2 低温不同时段胁迫组内参基因的稳定性评价 | 第32-33页 |
| 3.3.4.3 低温不同时段胁迫组内参基因的稳定性验证 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-36页 |
| 4 四季秋海棠BsMYB62的克隆表达分析 | 第36-49页 |
| 4.1 试验材料及处理 | 第36-37页 |
| 4.1.1 植物材料处理 | 第36页 |
| 4.1.2 质粒与菌株 | 第36页 |
| 4.1.3 试验试剂和药品 | 第36页 |
| 4.1.4 主要溶液和培养基配制 | 第36页 |
| 4.1.5 引物序列 | 第36-37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 BsMYB62转录因子CDS区的克隆 | 第37-38页 |
| 4.2.1.1 总RNA提取和质量检测 | 第37页 |
| 4.2.1.2 反转录合成cDNA第一链 | 第37页 |
| 4.2.1.3 BsMYB62转录因子CDS区的扩增 | 第37-38页 |
| 4.2.1.4 目的条带的回收 | 第38页 |
| 4.2.1.5 目的片段与载体连接 | 第38页 |
| 4.2.1.6 大肠杆菌感受态的转化和筛选 | 第38页 |
| 4.2.1.7 pMD18-T-BsMYB62质粒的提取 | 第38页 |
| 4.2.2 BsMYB62转录因子的生物信息学分析 | 第38-39页 |
| 4.2.3 低温和高光胁迫不同时间BsMYB62的实时荧光定量PCR | 第39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-47页 |
| 4.3.1 四季秋海棠BsMYB62转录因子CDS区的克隆 | 第39页 |
| 4.3.2 四季秋海棠BsMYB62基因的生物信息学分析 | 第39-46页 |
| 4.3.2.1 BsMYB62序列分析 | 第39-41页 |
| 4.3.2.2 BsMYB62蛋白基本理化性质预测 | 第41-42页 |
| 4.3.2.3 保守结构域预测 | 第42页 |
| 4.3.2.4 二级结构预测 | 第42-43页 |
| 4.3.2.5 跨膜区预测 | 第43页 |
| 4.3.2.6 信号肽预测 | 第43-44页 |
| 4.3.2.7 磷酸化和糖基化位点预测 | 第44页 |
| 4.3.2.8 系统发育树的构建 | 第44-46页 |
| 4.3.2.9 BsMYB62疏水性预测 | 第46页 |
| 4.3.3 低温和高光胁迫不同时间BsMYB62的表达分析 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 5 四季秋海棠BsMYB62互作蛋白的筛选 | 第49-71页 |
| 5.1 试验材料 | 第49-50页 |
| 5.1.1 植物材料处理 | 第49页 |
| 5.1.2 质粒与菌株 | 第49页 |
| 5.1.3 试验试剂和药品 | 第49页 |
| 5.1.4 主要溶液及培养基的配制 | 第49-50页 |
| 5.1.5 引物序列 | 第50页 |
| 5.2 试验方法 | 第50-60页 |
| 5.2.1 叶片cDNA文库的构建 | 第50-56页 |
| 5.2.1.1 总RNA的提取和质量检测 | 第50页 |
| 5.2.1.2 mRNA的分离纯化 | 第50-51页 |
| 5.2.1.3 cDNA第一链的合成 | 第51页 |
| 5.2.1.4 cDNA第二链的合成 | 第51-52页 |
| 5.2.1.5 cDNA与attB1重组接头连接及分离收集 | 第52页 |
| 5.2.1.6 初级文库的构建 | 第52-53页 |
| 5.2.1.7 初级文库的质量鉴定 | 第53-54页 |
| 5.2.1.8 次级文库的构建及质量鉴定 | 第54-55页 |
| 5.2.1.9 文库质粒转化Y187酵母菌株 | 第55-56页 |
| 5.2.2 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的构建 | 第56-58页 |
| 5.2.2.1 引入酶切位点的目的片段扩增 | 第56-57页 |
| 5.2.2.2 pGBKT7载体的双酶切 | 第57页 |
| 5.2.2.3 目的片段与载体连接 | 第57-58页 |
| 5.2.2.4 pGBKT7-BsMYB62转化大肠杆菌和鉴定 | 第58页 |
| 5.2.2.5 pGBKT7-BsMYB62质粒提取 | 第58页 |
| 5.2.3 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的毒性和自激活检测 | 第58-59页 |
| 5.2.3.1 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的毒性检测 | 第58页 |
| 5.2.3.2 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的白激活检测 | 第58-59页 |
| 5.2.4 文库筛选试验及阳性克隆的鉴定 | 第59-60页 |
| 5.2.4.1 Mating法酵母双杂交文库筛选 | 第59页 |
| 5.2.4.2 筛选并验证阳性克隆 | 第59页 |
| 5.2.4.3 候选阳性克隆酵母菌液PCR检测 | 第59-60页 |
| 5.2.4.4 酵母阳性克隆质粒的提取 | 第60页 |
| 5.2.4.5 阳性质粒的转化和鉴定 | 第60页 |
| 5.2.4.6 阳性克隆测序及序列分析 | 第60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-68页 |
| 5.3.1 mRNA的分离纯化和dscDNA的合成 | 第60页 |
| 5.3.2 文库鉴定 | 第60-63页 |
| 5.3.2.1 初级文库鉴定 | 第60-61页 |
| 5.3.2.2 次级文库鉴定 | 第61-62页 |
| 5.3.2.3 文库质粒转化Y187酵母菌株鉴定 | 第62-63页 |
| 5.3.3 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的构建 | 第63页 |
| 5.3.4 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的毒性和自激活检测 | 第63-68页 |
| 5.3.4.1 诱饵载体pGBKT7-BsMYB62的毒性检测 | 第63-64页 |
| 5.3.4.2 诱饵载体pGBKT7-BSMYB62的自激活检测 | 第64页 |
| 5.3.4.3 酵母双杂交筛选时3-AT的工作浓度 | 第64-65页 |
| 5.3.4.4 BsMYB62酵母双杂文库的筛选 | 第65-66页 |
| 5.3.4.5 候选蛋白阳性克隆的检测 | 第66-67页 |
| 5.3.4.6 测序结果分析 | 第67-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-71页 |
| 6 结论与展望 | 第71-72页 |
| 6.1 结论 | 第71页 |
| 6.2 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-82页 |
| 英文摘要 | 第82-85页 |
| 附表 转录组中不能正常扩增的其它备用内参基因 | 第85页 |
