| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-31页 |
| ·人防御素 | 第10-21页 |
| ·人防御素的组织分布 | 第10-11页 |
| ·人防御素的分子生物学特征 | 第11-16页 |
| ·分子结构 | 第11-13页 |
| ·基因结构及其定位 | 第13-14页 |
| ·基因的表达调控 | 第14-15页 |
| ·翻译后修饰 | 第15-16页 |
| ·人防御素的抗菌活性及其机理 | 第16-19页 |
| ·抗菌活性 | 第16-18页 |
| ·作用机理 | 第18-19页 |
| ·人防御素的医学价值及应用前景 | 第19-21页 |
| ·人β防御素-2(HBD-2)的重组生产 | 第21-22页 |
| ·基因工程生产HBD-2存在的问题及解决方法 | 第21-22页 |
| ·密码子优化 | 第22-23页 |
| ·融合表达 | 第23-31页 |
| ·pre-pro序列 | 第24页 |
| ·重复序列 | 第24页 |
| ·常用的融合表达体系 | 第24-29页 |
| ·温度对包含体形成的影响 | 第29-31页 |
| 第二章 HBD-2表达载体的构建 | 第31-42页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·材料和方法 | 第31-39页 |
| ·质粒和菌种 | 第31-35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第35-36页 |
| ·质粒抽提及转化 | 第36页 |
| ·感受态细胞的制备和质粒转化 | 第36页 |
| ·DNA的检测 | 第36页 |
| ·含重复序列的克隆载体和表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第39页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第39-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 各种HBD-2表达载体的表达比较 | 第42-56页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料和方法 | 第42-46页 |
| ·质粒和菌种 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·培养条件 | 第43页 |
| ·分析方法 | 第43-46页 |
| ·不同重复序列表达载体的表达情况 | 第46-51页 |
| ·pET28-nshBD2(n=1,2,4,8)为表达载体 | 第46-47页 |
| ·pQE30-nshBD2(n=1,2,4,8)为表达载体 | 第47页 |
| ·pBV220-nshBD2(n=1,2,4,8)为表达载体 | 第47-48页 |
| ·pGEX-nshBD2(n=1,2,4,8)为表达载体 | 第48页 |
| ·pET32-nshBD2(n=1,2,4,8)为表达载体 | 第48-50页 |
| ·pMAL-p2-nshBD2(n=1,4)为表达载体 | 第50-51页 |
| ·重复序列对宿主菌生长及质粒稳定性的影响 | 第51-54页 |
| ·重复序列对宿主菌生长的影响 | 第51-53页 |
| ·重复序列对质粒稳定性的影响 | 第53-54页 |
| ·密码子优化对目的蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 第四章 E.coli BL21(DE3)／pET32-shBD2发酵条件的研究 | 第56-66页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·材料与方法 | 第56-57页 |
| ·菌种 | 第56页 |
| ·培养基 | 第56页 |
| ·摇瓶发酵 | 第56-57页 |
| ·10L发酵罐发酵 | 第57页 |
| ·分析方法 | 第57页 |
| ·摇瓶发酵条件的优化 | 第57-63页 |
| ·培养基的选择 | 第57页 |
| ·培养温度 | 第57-60页 |
| ·摇瓶装液量 | 第60-61页 |
| ·诱导条件 | 第61-63页 |
| ·10L台式发酵罐的间歇发酵 | 第63-64页 |
| ·小结 | 第64-66页 |
| 第五章 HBD-3和HBD-4的重组表达 | 第66-73页 |
| ·引言 | 第66页 |
| ·材料和方法 | 第66-68页 |
| ·质粒和菌种 | 第66页 |
| ·培养基 | 第66页 |
| ·培养条件 | 第66页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第66页 |
| ·基于PCR的基因SOEing合成 | 第66-68页 |
| ·表达载体的构建 | 第68页 |
| ·分析方法 | 第68页 |
| ·经过密码子优化的HBD-3和HBD-4的基因合成 | 第68-69页 |
| ·HBD-3和HBD-4在pET-32a(+)系统中的表达 | 第69-72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 第六章 HBD-2的初步活性检测 | 第73-76页 |
| ·引言 | 第73页 |
| ·材料和方法 | 第73-74页 |
| ·敏感菌 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·固体培养法 | 第73-74页 |
| ·液体培养法 | 第74页 |
| ·分析方法 | 第74页 |
| ·固体培养法抑菌结果 | 第74-75页 |
| ·液体培养法抑菌结果 | 第75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第七章 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85页 |
