| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 缩略语表 | 第9-11页 |
| 第一部分 抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的基因克隆、表达及其三维结构模建 | 第11-54页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 1.实验材料 | 第13-15页 |
| ·细胞株 | 第13页 |
| ·菌株 | 第13页 |
| ·质粒 | 第13页 |
| ·试剂 | 第13-14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14-15页 |
| 2.实验方法 | 第15-30页 |
| ·基本分子生物学实验方法 | 第15-18页 |
| ·杂交瘤细胞的培养和亚克隆 | 第18-19页 |
| ·单链抗体基因的克隆构建 | 第19-24页 |
| ·单链抗体基因在大肠杆菌中的表达 | 第24-27页 |
| ·表达产物的初步纯化 | 第27页 |
| ·表达产物的活性分析 | 第27-29页 |
| ·单链抗体的计算机三维结构模建 | 第29-30页 |
| 3.实验结果 | 第30-48页 |
| ·杂交瘤细胞3D6的亚克隆 | 第30页 |
| ·单链抗体基因的克隆构建 | 第30-32页 |
| ·重组噬菌体抗体的筛选、鉴定 | 第32-33页 |
| ·单链抗体基因的鉴定和序列分析 | 第33-36页 |
| ·表达质粒pETscFv的构建 | 第36页 |
| ·单链抗体的表达 | 第36-37页 |
| ·表达产物的生物活性分析 | 第37-39页 |
| ·抗Ⅳ型胶原酶单链抗体的三维结构模建 | 第39-48页 |
| 4.讨论 | 第48-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 第二部分 抗Ⅳ型胶原酶单链抗体与力达霉素辅基蛋白融合基因在甲醇酵母中的表达 | 第54-79页 |
| 前言 | 第54-56页 |
| 1.实验材料 | 第56-59页 |
| ·菌株 | 第56页 |
| ·质粒 | 第56页 |
| ·PCR引物 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57-59页 |
| 2.实验方法 | 第59-62页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第59页 |
| ·毕赤酵母的电转化 | 第59-60页 |
| ·阳性转化子的筛选 | 第60页 |
| ·酵母基因组DNA的提取 | 第60-61页 |
| ·整合目的基因的PCR检测 | 第61页 |
| ·阳性酵母的诱导表达 | 第61页 |
| ·表达产物的ELISA检测 | 第61-62页 |
| ·表达产物的Western blot检测 | 第62页 |
| 3.实验结果 | 第62-72页 |
| ·重组表达质粒pKFv1027的构建 | 第62-67页 |
| ·毕赤酵母重组转化子的筛选 | 第67-69页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第69-70页 |
| ·重组酵母菌株G34的生长曲线测定 | 第70-71页 |
| ·酵母G34表达条件的初步优化 | 第71-72页 |
| 4.讨论 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 文献综述1：噬菌体呈现技术在发展肿瘤靶向剂中的应用 | 第79-101页 |
| 文献综述2：外源基因在甲醇营养型酵母中的高效表达 | 第101-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
