| 缩略语表 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 文献回顾 | 第13-26页 |
| 第一部分 胃癌及癌前病变组织端粒酶活性及端粒长度的研究 | 第26-41页 |
| 一、胃癌及癌前病变组织中的端粒酶活性 | 第26-34页 |
| (一) 材料 | 第26-29页 |
| (二) 方法 | 第29-31页 |
| 1、细胞培养 | 第29-30页 |
| 2、组织标本筛选 | 第30页 |
| 3、细胞及组织端粒酶上清提取 | 第30页 |
| 4、提取物蛋白浓度测定 | 第30页 |
| 5、建立放射性蜡膜介导热启动TRAP PCR方法 | 第30-31页 |
| 6、建立非放射性蜡膜介导TRAP PCR方法 | 第31页 |
| (三) 结果 | 第31-32页 |
| 1、人胃癌细胞系中的端粒酶活性 | 第31页 |
| 2、人胃癌组织及胃癌前病变组织中的端粒酶活性 | 第31页 |
| 3、TRAP银染法测定的胃癌细胞及组织中的端粒酶活性 | 第31-32页 |
| (四) 讨论 | 第32-34页 |
| 1、TRAP方法的建立及分析 | 第32-33页 |
| 2、端粒酶活性在人胃癌及癌前病变中的表达 | 第33-34页 |
| 二、原发性胃癌组织中TRF分析 | 第34-41页 |
| (一) 材料 | 第34-36页 |
| (二) 方法 | 第36-38页 |
| 1、组织DNA提取 | 第36页 |
| 2、基因组DNA的限制性酶切 | 第36页 |
| 3、端粒(TTAGGG)_4探针标记 | 第36-37页 |
| 4、λ DNA/Hind Ⅲ Marker标记 | 第37页 |
| 5、在琼脂糖凝胶上进行端粒DNA原位杂交 | 第37页 |
| 6、TRF长度分析 | 第37-38页 |
| 7、统计学处理 | 第38页 |
| (三) 结果 | 第38-39页 |
| 1、胃癌组织与正常胃组织端粒DNA凝胶原位杂交及密度扫描分析 | 第38页 |
| 2、胃癌组织与正常胃组织的平均TRF长度 | 第38页 |
| 3、端粒酶活性阴,阳性胃癌组织中的TRF长度 | 第38-39页 |
| (四) 讨论 | 第39-41页 |
| 1、关于端粒DNA在琼脂糖凝胶中的原位杂交 | 第39页 |
| 2、胃癌组织中的TRF变化 | 第39-41页 |
| 第二部分 端粒酶反义RNA对人胃癌细胞恶性表型的影响 | 第41-60页 |
| 一、主要材料 | 第41-44页 |
| (一) 主要试剂 | 第41页 |
| (二) 质粒与菌种 | 第41-42页 |
| (三) 细胞株 | 第42页 |
| (四) 裸鼠 | 第42-44页 |
| 二、实验方法 | 第44-47页 |
| (一) 质粒DNA转化与提取 | 第44页 |
| (二) pBBS—hTR表达载体转染SGC7901胃癌细胞 | 第44页 |
| (三) 细胞总RNA提取 | 第44页 |
| (四) 体外转录端粒酶RNA单链探针 | 第44-46页 |
| (五) RNA斑点杂交 | 第46页 |
| (六) 转染细胞生长情况观察 | 第46页 |
| (七) 转染细胞TRF长度分析 | 第46页 |
| (八) 转染细胞端粒酶活性检测 | 第46-47页 |
| (九) FCM测定转染细胞的细胞周期 | 第47页 |
| (十) FCM测定转染细胞胃癌相关抗原含量 | 第47页 |
| (十一) 透视电镜标本制备 | 第47页 |
| (十二) 裸鼠移植瘤试验 | 第47页 |
| 三、实验结果 | 第47-55页 |
| (一) 转化质粒纯度及酶切鉴定 | 第47页 |
| (二) 转染细胞抗性克隆筛选及hTR表达 | 第47-48页 |
| (三) 转染细胞生长曲线测定 | 第48-49页 |
| (四) 转染细胞TRF长度对比分析 | 第49页 |
| (五) 转染细胞端粒酶活性变化 | 第49页 |
| (六) 转染细胞的细胞周期观察 | 第49-52页 |
| (七) 转染细胞胃癌相关抗原含量表达 | 第52页 |
| (八) 转染细胞超微结构改变 | 第52页 |
| (九) 转染细胞的裸鼠移植瘤试验 | 第52-55页 |
| 四、讨论 | 第55-60页 |
| (一) pBBS及pBBS—hTR载体的鉴定分析 | 第55页 |
| (二) 多阳离子脂质体介导的基因转染 | 第55-56页 |
| (三) 反义hTR对人胃癌细胞恶性表型的逆转 | 第56-60页 |
| 1、转染胃癌细胞hTR表达的调控 | 第57页 |
| 2、反义hTR对胃癌细胞端粒及端粒酶活性的抑制作用 | 第57-58页 |
| 3、反义hTR对胃癌细胞凋亡的诱导效应 | 第58-59页 |
| 4、反义hTR对胃癌细胞增殖的影响 | 第59-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 附图 | 第61-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 发表论文 | 第85页 |
