| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-25页 |
| ·概述 | 第11-12页 |
| ·苯甲酸钠及代谢途径 | 第12-14页 |
| ·苯甲酸钠的特性 | 第12-13页 |
| ·苯甲酸钠降解代谢途径 | 第13-14页 |
| ·邻苯二酚 | 第14-18页 |
| ·邻苯二酚的特性 | 第14页 |
| ·国内邻苯二酚的应用进展 | 第14-15页 |
| ·邻苯二酚化学合成法生产的研究现状 | 第15-16页 |
| ·生物法合成邻苯二酚研究现状 | 第16-17页 |
| ·合成邻苯二酚关键基因的研究 | 第17-18页 |
| ·产邻苯二酚基因工程菌的构建研究进展 | 第18-23页 |
| ·产邻苯二酚基因工程菌现状 | 第18-19页 |
| ·基因工程菌的构建策略 | 第19-21页 |
| ·基因工程菌的构建载体 | 第21-22页 |
| ·基因工程菌构建研究中存在的问题 | 第22-23页 |
| ·本课题研究的目的意义与方法 | 第23-25页 |
| ·本课题研究的目的意义 | 第23页 |
| ·本课题的研究方法 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-49页 |
| ·实验材料 | 第25-30页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·质粒 | 第25-26页 |
| ·所用引物 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·培养条件 | 第27-28页 |
| ·菌体保存 | 第28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-49页 |
| ·Pseudomonas sp.B-1基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·DNA的定量方法 | 第31-32页 |
| ·PCR技术克隆苯甲酸钠基因簇 | 第32-34页 |
| ·纯化的PCR产物分别与克隆载体的连接 | 第34-35页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第35-36页 |
| ·转化子质粒DNA的提取 | 第36-37页 |
| ·质粒和的限制性内切酶酶切验证 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的构建 | 第38-43页 |
| ·Pseudomonasp sp.B3-1基因工程菌的构建 | 第43-44页 |
| ·基因工程菌的验证 | 第44-45页 |
| ·Southern杂交验证 | 第45-47页 |
| ·邻苯二酚的测定 | 第47-49页 |
| 第三章 苯甲酸双加氧酶基因簇的克隆与分析 | 第49-61页 |
| ·苯甲酸双加氧酶基因簇的克隆 | 第49-51页 |
| ·Pseudomonas sp.B-1基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·PCR扩增苯甲酸双加氧酶基因簇 | 第50页 |
| ·连接、转化及酶切验证结果 | 第50-51页 |
| ·PCR扩增产物的序列测定及分析 | 第51-60页 |
| ·PCR扩增产物的序列测定 | 第51-53页 |
| ·PCR扩增产物的序列分析 | 第53-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第四章 产邻苯二酚基因工程菌的构建 | 第61-72页 |
| ·重组质粒的构建 | 第61-66页 |
| ·载体质粒 | 第61-63页 |
| ·广宿主重组质粒的构建 | 第63-66页 |
| ·基因工程菌的构建 | 第66-70页 |
| ·三亲本杂交 | 第66页 |
| ·三亲接合子的PCR验证 | 第66-69页 |
| ·Southern杂交验证 | 第69-70页 |
| ·工程菌邻苯二酚产量的测定 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第五章 基因工程菌Pseudomonas sp.B3-1产邻苯二酚条件的优化 | 第72-81页 |
| ·发酵的基础培养基和培养条件 | 第72-73页 |
| ·工程菌的生长与邻苯二酚产量的关系 | 第73页 |
| ·苯甲酸钠浓度对Pseudomonas sp.B3-1产邻苯二酚的影响 | 第73-74页 |
| ·不同氮源对Pseudomonas sp.B3-1产邻苯二酚的影响 | 第74-75页 |
| ·聚蛋白胨浓度对Pseudomonas sp.B3-1产邻苯二酚的影响 | 第75-77页 |
| ·PH对Pseudomonas sp.B3-1产邻苯二酚的影响 | 第77页 |
| ·正交试验 | 第77-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第六章 结论与讨论 | 第81-85页 |
| ·结论 | 第81-82页 |
| ·讨论 | 第82-84页 |
| ·产邻苯二酚基因工程菌构建策略的选择 | 第82-83页 |
| ·基因工程菌邻苯二酚产量提高不显著的原因分析 | 第83-84页 |
| ·利用基因打靶技术将基因插入到受体菌中的非重要功能区 | 第84页 |
| ·本研究的后续工作 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第94页 |
