| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 中文目录 | 第6-10页 |
| 英文目录 | 第10-13页 |
| 1 前言 | 第13-43页 |
| ·磷脂酰肌醇-3激酶家族简介 | 第13-24页 |
| ·PI3K家族成员 | 第13-17页 |
| ·Ⅰ型PI3K | 第13-16页 |
| ·Ⅱ型PI3K | 第16页 |
| ·Ⅲ型PI3K | 第16-17页 |
| ·PI3K信号通路 | 第17-20页 |
| ·PI3K信号通路 | 第17-18页 |
| ·PI3K的激活及上游分子 | 第18-19页 |
| ·PI3K的下游分子 | 第19页 |
| ·PI3K活性调节 | 第19-20页 |
| ·PI3K的生物学功能 | 第20-24页 |
| ·活化AKT | 第20页 |
| ·激活PKB(protein kinase PKB)和MAPK(mitogen activated protein kinase) | 第20页 |
| ·激活BTK(Brutons tyrosine kinase) | 第20-21页 |
| ·PTB结构域类(phosphotyrosine binding domain) | 第21页 |
| ·PI3K与细胞游走及发育分化 | 第21页 |
| ·PI3P与细胞内外物质运输 | 第21-22页 |
| ·参与细胞骨架重组 | 第22页 |
| ·PI3K与细胞癌性转化 | 第22页 |
| ·与肿瘤发生有关 | 第22-23页 |
| ·与神经生理有关 | 第23页 |
| ·其它 | 第23-24页 |
| ·A型流感病毒非结构蛋白NS1简介 | 第24-38页 |
| ·禽流感病毒的分子结构 | 第24页 |
| ·NS1蛋白的分群及进化分析 | 第24-26页 |
| ·NS1基因及蛋白结构 | 第26-31页 |
| ·NS1蛋白基因 | 第26-27页 |
| ·NS1蛋白结构 | 第27-31页 |
| ·NS1蛋白的功能 | 第31-38页 |
| ·NS1蛋白有利于病毒的合成与表达 | 第32-33页 |
| ·NS1对宿主细胞凋亡的影响 | 第33页 |
| ·NS1蛋白对宿主细胞蛋白合成的抑制作用 | 第33-35页 |
| ·NS1蛋白的干扰素及肿瘤坏死因子的颉颃作用 | 第35-38页 |
| ·A型流感病毒非结构蛋白NS1与PI3K相互作用研究 | 第38-42页 |
| ·A型流感病毒感染的细胞中PI3K的激活以及功能研究 | 第38-39页 |
| ·防御病毒功能 | 第38页 |
| ·促进病毒的复制 | 第38页 |
| ·调控病毒进入细胞 | 第38-39页 |
| ·防止未成熟的细胞凋亡 | 第39页 |
| ·A型流感病毒NS1蛋白激活PI3K的研究-相互作用及活性相关的基元和结构域的确定 | 第39-42页 |
| ·A型流感病毒的SH2基元 | 第40页 |
| ·A型流感病毒的SH3基元 | 第40页 |
| ·P85蛋白不同的NS1结合区域 | 第40-41页 |
| ·适配蛋白Crk/CrkL与A型流感病毒NS1蛋白相互作用 | 第41-42页 |
| ·立题背景 | 第42-43页 |
| 2 材料和方法 | 第43-57页 |
| ·常用药品和试剂 | 第43页 |
| ·DNA相关实验方法 | 第43-52页 |
| ·基因序列 | 第43页 |
| ·质粒载体 | 第43-45页 |
| ·大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞的制备和DNA转化 | 第45-46页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第46-48页 |
| ·质粒DNA的工具酶处理 | 第48页 |
| ·纯化DNA片段 | 第48-49页 |
| ·DNA连接反应 | 第49-50页 |
| ·PCR相关实验 | 第50-52页 |
| ·蛋白质相关实验方法 | 第52-56页 |
| ·亲和层析纯化 | 第52-53页 |
| ·Bradford法测蛋白浓度 | 第53-54页 |
| ·GST-pull down assay | 第54页 |
| ·蛋白质的SDS-PAGE电泳与Western blot分析 | 第54-56页 |
| ·晶体相关试验方法 | 第56-57页 |
| ·坐滴结晶法 | 第56-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-69页 |
| ·P85β和NS1质粒的构建及诱导表达 | 第57-59页 |
| ·P85β质粒构建及诱导表达 | 第57-59页 |
| ·NS1质粒构建及诱导表达 | 第59页 |
| ·P85β和NS1相互作用区域的确定 | 第59-62页 |
| ·GST pull down assay验证相互作用区域 | 第59-61页 |
| ·相互作用没有流感病毒NS1蛋白的亚型特异性 | 第61-62页 |
| ·P85β蛋白和NS1蛋白的结合比例 | 第62-63页 |
| ·P85β-iSH2蛋白和NS1-ED(效应区)蛋白以及其复合物的纯化 | 第63-65页 |
| ·NS1-ED(效应区)和P85β-iSH2蛋白的单独纯化 | 第63-64页 |
| ·P85β-iSH2+NS1-ED(效应区)蛋白复合物的一步纯化 | 第64-65页 |
| ·增加P85β-iSH2蛋白溶解性的策略 | 第65-68页 |
| ·更换表达载体 | 第65-66页 |
| ·突变P85β-iSH2疏水氨基酸 | 第66-67页 |
| ·使用各种化学试剂 | 第67-68页 |
| ·P85β-iSH2+NS1-ED(效应区)蛋白复合物结晶条件筛选 | 第68-69页 |
| 4 结果讨论 | 第69-74页 |
| 附录一:结晶筛选结果统计表 | 第74-78页 |
| 附录二:图表索引 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
