| 中文摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-27页 |
| 1 蛋白激酶Ca相互作用蛋白(PICK1) | 第12-20页 |
| ·PICK1的分子结构 | 第14-19页 |
| ·PICK1的生理生化功能 | 第19-20页 |
| 2 SNAP(可溶性NSF相关蛋白) | 第20-22页 |
| 3 PICK1和α-SNAP蛋白的相互作用 | 第22-27页 |
| 第二章 PICK1蛋白及不同结构域的表达和纯化 | 第27-36页 |
| 1 前言 | 第27页 |
| 2 材料 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第27页 |
| ·菌株、质粒和免疫分析试剂 | 第27-28页 |
| 3 方法 | 第28-31页 |
| ·PICK1及其结构域表达载体的构建 | 第28-30页 |
| ·PICK1及其结构域的表达纯化 | 第30-31页 |
| ·Western blot分析 | 第31页 |
| 4 结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·PICK1的表达纯化及Western blot鉴定 | 第31-32页 |
| ·PDZ的表达纯化及Western blot鉴定 | 第32-33页 |
| ·MBP-BAR的表达纯化及其Western blot鉴定 | 第33-36页 |
| 第三章 α-SNAP蛋白及其突变体的克隆、表达和纯化 | 第36-43页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 材料 | 第36页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·相关试剂 | 第36页 |
| 3 方法 | 第36-38页 |
| ·α-SNAP蛋白及其突变体重组质粒的构建 | 第36-38页 |
| ·α-SNAP蛋白及其突变体的表达与纯化 | 第38页 |
| ·α-SNAP蛋白及其突变体的免疫学鉴定 | 第38页 |
| 4 结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·α-SNAP蛋白及其突变体重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·α-SNAP蛋白及其突变体蛋白的表达和纯化 | 第39-43页 |
| 第四章 PICK1和α-SNAP蛋白之间的相互作用初步分析 | 第43-57页 |
| 第一节 亲和层析法体外检测PICK1和α-SNAP蛋白之间的相互作用 | 第43-50页 |
| 1 前言 | 第43页 |
| 2 材料 | 第43页 |
| 3 方法 | 第43-45页 |
| ·亲和柱法 | 第43-44页 |
| ·化学偶联法 | 第44-45页 |
| 4 结果与讨论 | 第45-50页 |
| ·GST-SNAP和PICK1不同结构域间的相互作用 | 第45-46页 |
| ·his-SNAP和PICK1不同结构域间的相互作用 | 第46-47页 |
| ·PICK1和SNAP不同区域的Pull-down实验 | 第47页 |
| ·his-SNAP_(1-115)和GST-PDZ相互作用的浓度依赖性关系 | 第47-48页 |
| ·偶联到seperose-4B的his-PDZ与SNAP片段间Pull-Down实验 | 第48-50页 |
| 第二节 酵母双杂交法体内检测PICK1和α-SNAP蛋白之间的相互作用 | 第50-57页 |
| 1 前言 | 第50页 |
| 2 材料 | 第50-51页 |
| ·菌株和质粒 | 第50页 |
| ·主要酶和生化试剂 | 第50-51页 |
| 3 方法 | 第51-53页 |
| ·酵母双杂交重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| ·酵母的共转化 | 第52-53页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性分析 | 第53页 |
| 4 结果 | 第53-55页 |
| 5 讨论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
