| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-32页 |
| ·松树及其分布 | 第13-15页 |
| ·松树落针病及其病原 | 第15-19页 |
| ·病害症状 | 第15页 |
| ·病害分布及危害 | 第15页 |
| ·松落针病病原及发病规律 | 第15-19页 |
| ·病原菌的确定 | 第15-16页 |
| ·散斑壳菌的生态习性及其致病性 | 第16-18页 |
| ·松落针病发病规律及侵染循环 | 第18-19页 |
| ·散斑壳属菌的分类 | 第19-21页 |
| ·散斑壳属的分类地位及研究进展 | 第19-20页 |
| ·松针上散斑壳的分类 | 第20-21页 |
| ·分子生物学技术在植物病原真菌研究中的应用 | 第21-29页 |
| ·遗传标记 | 第21-22页 |
| ·PCR技术 | 第22-23页 |
| ·限制性片段长度多态性(RFLP) | 第23页 |
| ·随机扩增多态性DNA技术(RAPD) | 第23-25页 |
| ·核酸序列分析 | 第25-26页 |
| ·rRNA基因ITS区序列分析在真菌分类鉴定及系统学研究中的应用 | 第26-29页 |
| ·真菌rRNA组成与结构 | 第27页 |
| ·ITS区序列分析与真菌分类鉴定 | 第27-28页 |
| ·引物与核糖体核酸序列分析的应用 | 第28-29页 |
| ·分子生物学技术在松生散斑壳属真菌研究中的应用 | 第29-30页 |
| ·四川松树落针病及其病原菌研究进展 | 第30-31页 |
| ·本研究的目的、意义及拟解决的主要问题 | 第31-32页 |
| 2 四川松树针叶上散斑壳菌的形态学分类与分离培养 | 第32-44页 |
| ·样品的采集与整理 | 第32页 |
| ·形态学鉴定 | 第32-33页 |
| ·外部形态观察 | 第32-33页 |
| ·制片及显微检查 | 第33页 |
| ·描述及绘图 | 第33页 |
| ·发病率的统计 | 第33页 |
| ·培养性状的观察及记载 | 第33页 |
| ·病原菌的分离培养 | 第33页 |
| ·培养性状的观察 | 第33页 |
| ·四川松树针叶上散斑壳菌种的形态描述及种的检索表 | 第33-37页 |
| ·针叶树散斑壳 | 第34页 |
| ·松针散斑壳 | 第34页 |
| ·四川散斑壳 | 第34-35页 |
| ·印度散斑壳 | 第35页 |
| ·南方散斑壳 | 第35-36页 |
| ·二郎山散斑壳 | 第36页 |
| ·库曼散斑壳 | 第36页 |
| ·分种检索表 | 第36-37页 |
| ·四川松树林区松落针病发病情况及病原菌 | 第37-39页 |
| ·培养性状的记述 | 第39-43页 |
| ·人工培养条件下散斑壳菌无有性态产生 | 第43-44页 |
| 3 四川松树散斑壳菌的RAPD分子标记及遗传多样性分析 | 第44-59页 |
| ·供试菌株 | 第44页 |
| ·仪器与试剂 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第44-45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·菌丝体的培养与收集 | 第45页 |
| ·DNA的提取及检测 | 第45-46页 |
| ·DNA的提取 | 第45-46页 |
| ·DNA的检测及定量 | 第46页 |
| ·基因组DNA的PCR扩增 | 第46-48页 |
| ·引物的筛选 | 第46-47页 |
| ·RAPD反应体系的优化 | 第47页 |
| ·反应条件的建立 | 第47-48页 |
| ·反应产物的检测 | 第48页 |
| ·数据处理 | 第48页 |
| ·散斑壳菌的RAPD标记与遗传多样性分析 | 第48-51页 |
| ·DNA的提取及引物的筛选 | 第48-49页 |
| ·PCR反应条件的优化 | 第49-51页 |
| ·dNTPs浓度对PCR的影响 | 第49-50页 |
| ·Mg~(2+)浓度对PCR的影响 | 第50页 |
| ·DNA模板的量对PCR的影响 | 第50-51页 |
| ·Taq酶用量对PCR的影响 | 第51页 |
| ·RAPD引物浓度对PCR的影响 | 第51页 |
| ·散斑壳菌的RAPD结果分析 | 第51-59页 |
| ·散斑壳RAPD分析的最佳反应条件 | 第52页 |
| ·扩增图谱的特征 | 第52页 |
| ·遗传相似性的系统聚类分析 | 第52-59页 |
| ·24株散斑壳菌系统聚类分析 | 第52-56页 |
| ·系统聚类与地理来源相关性分析 | 第56-57页 |
| ·系统聚类与寄主的相关性分析 | 第57-59页 |
| 4 四川松树散斑壳菌的rRNA基因ITS区的PCR、克隆和序列分析 | 第59-74页 |
| ·试验菌株 | 第59页 |
| ·药品和试剂 | 第59页 |
| ·常规药品及试剂 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·分子生物学试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器设备 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-63页 |
| ·散斑壳真菌细胞总DNA的提取 | 第60页 |
| ·不同种散斑壳菌丝体的获得 | 第60页 |
| ·散斑壳真菌细胞总DNA的提取 | 第60页 |
| ·散斑壳属不同种rRNA基因ITS区的PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·扩增引物 | 第60页 |
| ·PCR扩增反应体系 | 第60-61页 |
| ·PCR扩增反应循环 | 第61页 |
| ·PCR产物电泳检测 | 第61页 |
| ·不同种散斑壳rRNA基因ITS区的PCR扩增片段的克隆 | 第61-63页 |
| ·PCR扩增DNA片段的纯化和回收 | 第61页 |
| ·JM109载体菌感受态细胞的制备 | 第61-62页 |
| ·回收的DNA片段与pUCm-T载体的连接 | 第62页 |
| ·重组质粒转入JM109感受态细胞 | 第62页 |
| ·阳性克隆菌株的筛选和鉴定 | 第62-63页 |
| ·克隆片段的DNA序列测定及分析 | 第63页 |
| ·DNA序列的测定 | 第63页 |
| ·DNA序列的分析 | 第63页 |
| ·结果与分析 | 第63-72页 |
| ·散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS区序列 | 第63-69页 |
| ·散斑壳属不同菌株rRNA基因ITS序列的系统发育分析 | 第69-72页 |
| ·与不同散斑壳菌株的RAPD聚类结果的对比分析 | 第72-74页 |
| 5 讨论与结论 | 第74-77页 |
| ·四川松针散斑壳菌的种群结构复杂多样 | 第74页 |
| ·改良氯化苄法、改良二次沉淀法是散斑壳菌总DNA的提取的有效方法 | 第74页 |
| ·四川松树上散斑壳菌遗传多样性丰富 | 第74-75页 |
| ·四川松针散斑壳属菌株rRNA基因ITS区序列分析 | 第75-77页 |
| 6 主要参考文献 | 第77-86页 |
| 附图1:四川松树上7种散斑壳菌子囊果外部形态 | 第86-87页 |
| 附图2-5:23℃条件下各菌株在PDA培养基上菌落形状 | 第87-91页 |
| 附录:已注册并被GenBank接受的四川松针上散斑壳菌rDNA的ITS区序列注册号 | 第91-100页 |
| 已发表和待发表相关学术论文 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
