| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 转录因子概述及植物WRKY 转录因子的特点 | 第10-17页 |
| ·WRKY 转录因子的概况 | 第11页 |
| ·WRKY 转录因子的结构 | 第11-13页 |
| ·WRKY 结构域 | 第11-13页 |
| ·WRKY 的核定位信号 | 第13页 |
| ·WRKY 的其他结构域 | 第13页 |
| ·WRKY 转录因子的分类 | 第13-14页 |
| ·WRKY 基因的表达及蛋白的调控功能 | 第14-16页 |
| ·WRKY 基因的表达 | 第14页 |
| ·WRKY 转录因子的调控功能 | 第14-16页 |
| ·水稻WRKY 转录因子的研究状况 | 第16-17页 |
| 2 转录因子靶基因的鉴定 | 第17-22页 |
| ·通过基因表达水平变化鉴别靶基因 | 第17-18页 |
| ·通过转录因子特异结合的靶序列鉴别靶基因 | 第18-22页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第18-19页 |
| ·染色质免疫沉淀法 | 第19-20页 |
| ·Pull-down | 第20-21页 |
| ·蛋白结合芯片法 | 第21-22页 |
| 第二章 SUSIRI 基因的生物信息学分析及亚细胞定位 | 第22-34页 |
| 1 实验材料 | 第22页 |
| ·生物信息分析工具 | 第22页 |
| ·基因与载体 | 第22页 |
| ·酶与试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要引物 | 第22页 |
| 2 实验方法 | 第22-27页 |
| ·SUSISI 基因的生物信息学分析 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23页 |
| ·目的片段的回收及纯化 | 第23-24页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第24页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌及筛选 | 第24页 |
| ·转化子的PCR 鉴定 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备(CaCl_2 法) | 第24-25页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第25页 |
| ·GFP 融合载体构建 | 第25-26页 |
| ·载体与基因片段的酶切 | 第25-26页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化及PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·基因枪轰击及观察 | 第26-27页 |
| ·钨粉悬浮液制备 | 第26页 |
| ·钨粉与质粒DNA 的包埋 | 第26-27页 |
| ·轰击受体材料与显微观察 | 第27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-32页 |
| ·结构域分析 | 第27-28页 |
| ·亚细胞定位分析 | 第28-29页 |
| ·跨膜性分析 | 第29页 |
| ·功能预测 | 第29-30页 |
| ·SUSIRI 与GFP 融合载体的构建 | 第30-32页 |
| ·显微观察细胞定位 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 SUSIRI 基因的原核表达 | 第34-43页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·培养基和相关溶液 | 第34页 |
| ·主要引物 | 第34-35页 |
| 2 实验方法 | 第35-38页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| ·表达载体与目的片段DNA 的酶切 | 第35页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒转化原核表达菌及鉴定 | 第36页 |
| ·SUSIRI 基因在大肠杆菌的诱导表达 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶检测 | 第36页 |
| ·SDS 聚丙烯酰胺凝胶染色 | 第36-37页 |
| ·原核表达蛋白的Western blot 检测 | 第37页 |
| ·转膜 | 第37页 |
| ·杂交 | 第37页 |
| ·原核表达蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-41页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第38页 |
| ·表达载体的鉴定 | 第38-40页 |
| ·重组质粒的PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒的测序 | 第39-40页 |
| ·SUSIRI 基因在大肠杆菌中的表达 | 第40-41页 |
| ·PET-SU 和PQE-SU 的诱导表达 | 第40页 |
| ·PET-SU 最佳表达时间的确定 | 第40-41页 |
| ·SUSIRI 蛋白的纯化 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 转录因子SUSIRI 靶基因的初步筛选 | 第43-50页 |
| 1 实验材料 | 第43页 |
| ·植物材料 | 第43页 |
| ·酶与试剂 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·培养基和相关溶液 | 第43页 |
| ·扩增引物 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-46页 |
| ·水稻材料的培养 | 第43-44页 |
| ·粳稻日本晴总DNA 的提取（CTAB 法） | 第44页 |
| ·Pull-down 法筛选DNA 靶标片段 | 第44-46页 |
| ·水稻总DNA 的酶切 | 第44页 |
| ·酶切DNA 的纯化 | 第44页 |
| ·接头的制备 | 第44-45页 |
| ·接头与酶切DNA 的连接 | 第45页 |
| ·Pull-down 法 | 第45-46页 |
| ·候选靶基因的鉴定 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-48页 |
| ·水稻DNA 的酶切与接头DNA 的PCR 扩增 | 第46页 |
| ·Pull-down 法筛选靶基因 | 第46-47页 |
| ·候选靶基因的信息 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 附录：常用溶液 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |