| 摘要 | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 奶牛早期妊娠诊断研究进展 | 第10-12页 |
| 1.1 直肠触诊法 | 第10页 |
| 1.2 超声波诊断法(Ultrasonography) | 第10页 |
| 1.3 血小板计数法 | 第10-11页 |
| 1.4 放射免疫和酶免疫测定孕酮法 | 第11页 |
| 1.5 免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)的原理及应用 | 第11-12页 |
| 2 妊娠相关糖蛋白在反刍动物早期妊娠诊断应用中的研究进展 | 第12-16页 |
| 2.1 妊娠相关糖蛋白(PAG)简介 | 第12-13页 |
| 2.2 妊娠相关糖蛋白(PAG)的生化特性 | 第13页 |
| 2.3 妊娠相关糖蛋白(PAG)的功能 | 第13-14页 |
| 2.4 母畜怀孕期间妊娠相关糖蛋白(PAG)的浓度变化 | 第14页 |
| 2.5 PAG在反刍动物早期妊娠诊断上的应用 | 第14-16页 |
| 2.6 展望 | 第16页 |
| 3 本实验研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 实验一 PAG1(54-380aa)重组抗原制备 | 第17-25页 |
| 1 材料与方法 | 第17-19页 |
| 1.1 目的基因序列 | 第17页 |
| 1.2 实验仪器、试剂、耗材 | 第17-19页 |
| 1.2.1 实验中主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 1.2.2 实验试剂及耗材 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-22页 |
| 2.1 基因合成 | 第19页 |
| 2.2 载体质粒pET30a与目的基因的双酶切和连接 | 第19-20页 |
| 2.2.1 酶切 | 第19页 |
| 2.2.2 酶切产物胶回收 | 第19-20页 |
| 2.2.3 连接转化 | 第20页 |
| 2.3 小量表达及检测 | 第20-21页 |
| 2.3.1 目的蛋白诱导表达 | 第20-21页 |
| 2.3.2 SDS-PAGE电泳分析 | 第21页 |
| 2.4 大量表达 | 第21页 |
| 2.5 蛋白质纯化(洗包涵体) | 第21-22页 |
| 3 结果和分析 | 第22-24页 |
| 3.1 测序验证 | 第22-23页 |
| 3.2 小量表达检测分析 | 第23页 |
| 3.3 蛋白表达定位分析 | 第23-24页 |
| 3.4 目的蛋白纯化 | 第24页 |
| 4 小结 | 第24-25页 |
| 实验二 PAG1多克隆抗体的制备 | 第25-32页 |
| 1 材料和方法 | 第25-27页 |
| 1.1 抗原选择 | 第25-26页 |
| 1.2 实验动物 | 第26页 |
| 1.3 仪器和试剂 | 第26-27页 |
| 1.3.1 实验中的主要仪器设备 | 第26页 |
| 1.3.2 实验中主要试剂及配制 | 第26-27页 |
| 2 实验过程 | 第27-29页 |
| 2.1 免疫 | 第27页 |
| 2.2 耳静脉取阴性血 | 第27页 |
| 2.3 颈动脉取阳性血 | 第27-28页 |
| 2.4 ELISA测定效价 | 第28页 |
| 2.5 抗体纯化步骤 | 第28-29页 |
| 2.4.1 样品预处理 | 第28页 |
| 2.4.2 凝胶的准备和洗涤 | 第28页 |
| 2.4.3 待偶联多肽的处理 | 第28页 |
| 2.4.4 偶联反应 | 第28页 |
| 2.4.5 封闭过程 | 第28-29页 |
| 2.4.6 洗涤及平衡 | 第29页 |
| 2.4.7 待纯化样品准备及上样 | 第29页 |
| 2.4.8 洗杂 | 第29页 |
| 2.4.9 洗脱 | 第29页 |
| 2.4.10 柱子的再生和保存 | 第29页 |
| 3 抗体检测 | 第29-31页 |
| 3.1 ELISA检测血清效价 | 第29-30页 |
| 3.2 检测抗体浓度 | 第30页 |
| 3.3 SDS-PAGE检测抗体纯度 | 第30-31页 |
| 3.4 ELISA检测抗体滴度 | 第31页 |
| 4 小结 | 第31-32页 |
| 实验三 PAG1单克隆抗体的制备 | 第32-52页 |
| 1 材料和方法 | 第32-33页 |
| 1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.2 仪器与试剂 | 第32-33页 |
| 1.2.1 实验中的主要仪器和器材 | 第32页 |
| 1.2.2 实验中的主要试剂级配制 | 第32-33页 |
| 2 实验过程 | 第33-36页 |
| 2.1 免疫 | 第33页 |
| 2.2 免疫效价检测 | 第33页 |
| 2.3 细胞融合实验 | 第33-34页 |
| 2.3.1 sp2/0细胞细胞复苏操作 | 第33页 |
| 2.3.2 sp2/0细胞培养操作 | 第33-34页 |
| 2.3.3 细胞冻存操作 | 第34页 |
| 2.3.4 细胞融合操作 | 第34页 |
| 2.4 挑克隆 | 第34页 |
| 2.5 单克隆细胞1筛 | 第34-35页 |
| 2.6 单克隆细胞2筛 | 第35页 |
| 2.7 细胞亚类鉴定 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-51页 |
| 3.1 小鼠的免疫结果 | 第36页 |
| 3.2 单克隆抗体初筛数据 | 第36-46页 |
| 3.3 单克隆抗体二筛结果 | 第46-48页 |
| 3.4 亚类筛选结果 | 第48-50页 |
| 3.5 单克隆细胞株信息汇总 | 第50-51页 |
| 4 小结 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| Abstract | 第58页 |
| 致谢 | 第60页 |
