| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 稻瘟病概述 | 第11页 |
| 1.2 AAA-ATPase基因家族概述 | 第11-16页 |
| 1.2.1 AAA-ATPase简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 AAA-ATPase结构特征 | 第12-14页 |
| 1.2.3 AAA-ATPase的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.4 AAA-ATPase在植物抗病反应中的相关研究 | 第15-16页 |
| 1.3 植物的诱导抗病性 | 第16-17页 |
| 1.3.1 植物诱导抗病性概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 水稻中诱导抗性的研究 | 第17页 |
| 1.4 研究目的及内容 | 第17-19页 |
| 第二章 OsAAA1诱导型启动子转基因植株的分子鉴定与抗病性分析 | 第19-32页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.2.1 稻瘟病菌和水稻品种 | 第19-20页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.2.4 引物序列 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.3.1 水稻材料的准备 | 第21-22页 |
| 2.3.1.1 水稻幼苗的培育 | 第21页 |
| 2.3.1.2 诱导型启动子转基因植株的阳性鉴定 | 第21页 |
| 2.3.1.2.1水稻基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.1.2.2转基因水稻阳性植株的PCR鉴定 | 第22页 |
| 2.3.2 稻瘟病菌接种 | 第22-23页 |
| 2.3.3 诱导型启动子转基因水稻相关基因表达量的检测 | 第23-25页 |
| 2.3.3.1 水稻叶片总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3.3.2 cDNA的合成 | 第24页 |
| 2.3.3.3 相关基因的表达量分析 | 第24-25页 |
| 2.4 实验结果 | 第25-31页 |
| 2.4.1 OsAAA1诱导型启动子转基因水稻阳性鉴定结果 | 第25-26页 |
| 2.4.2 稻瘟病菌接种与抗性鉴定 | 第26-28页 |
| 2.4.2.1 喷雾法接种稻瘟病菌 | 第26-28页 |
| 2.4.2.2 离体法接种稻瘟病菌结果 | 第28页 |
| 2.4.3 接种前后OsAAA1的表达量分析 | 第28-29页 |
| 2.4.4 接种稻瘟病菌前后相关防御基因的表达量检测 | 第29-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 OsAAA1RNAi转基因植株的分子鉴定与抗病性分析 | 第32-39页 |
| 3.1 前言 | 第32页 |
| 3.2 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.2.1 稻瘟病菌和水稻品种 | 第32页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第32页 |
| 3.2.3 主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.2.4 引物与PCR程序 | 第32-33页 |
| 3.3 实验方法 | 第33-34页 |
| 3.3.1 材料的准备 | 第33-34页 |
| 3.3.1.1 水稻幼苗的培育 | 第33页 |
| 3.3.1.2 OsAAA1RNAiT_2代转基因幼苗的阳性鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.1.2.1 幼苗基因组DNA的提取 | 第33页 |
| 3.3.1.2.2 幼苗的PCR阳性鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.1.3 OsAAA1RNAiT_2代转基因幼苗的表达量鉴定 | 第34页 |
| 3.3.1.3.1 幼苗总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.3.1.3.2 幼苗cDNA的合成 | 第34页 |
| 3.3.1.3.3 幼苗表达量的鉴定 | 第34页 |
| 3.3.2 稻瘟病菌接种 | 第34页 |
| 3.3.3 qPCR检测OsAAA1的表达量 | 第34页 |
| 3.4 实验结果 | 第34-37页 |
| 3.4.1 OsAAA1RNAiT_2代转基因幼苗的阳性植株鉴定 | 第34-35页 |
| 3.4.2 转基因幼苗OsAAA1的表达量检测 | 第35-37页 |
| 3.4.3 OsAAA1RNAi幼苗的抗病性鉴定 | 第37页 |
| 3.5 讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 OsAAA1互作蛋白的筛选 | 第39-57页 |
| 4.1 前言 | 第39页 |
| 4.2 实验材料 | 第39-42页 |
| 4.2.1 载体与菌株 | 第39-40页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.2.3 主要仪器设备 | 第40页 |
| 4.2.4 引物和PCR程序 | 第40-42页 |
| 4.3 实验方法 | 第42-48页 |
| 4.3.1 OsAAA1酵母双杂交相关载体的构建 | 第42-46页 |
| 4.3.1.1 OsAAA1点对点验证载体的构建 | 第43-45页 |
| 4.3.1.1.1 OsAAA1的N端和C端的PCR扩增 | 第43页 |
| 4.3.1.1.2 回收片段及载体的双酶切 | 第43-44页 |
| 4.3.1.1.3 载体与目的片段连接 | 第44页 |
| 4.3.1.1.4 连接产物的转化及阳性菌落的鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.1.2 OsAAA1核文库筛选诱饵载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.3.1.2.1 OsAAA1的全长、N端和C端的PCR扩增 | 第45页 |
| 4.3.1.2.2 OsAAA1全长、N端和C端入门载体的构建 | 第45页 |
| 4.3.1.2.3 诱饵载体pDEST32-OsAAA1F/N/C载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.3.2 OsAAA1互作蛋白的筛选 | 第46页 |
| 4.3.2.1 酵母感受态细胞的制备 | 第46页 |
| 4.3.2.2 质粒DNA转化酵母感受态细胞 | 第46页 |
| 4.3.3 OsAAA1互作蛋白的BiFC载体构建 | 第46-47页 |
| 4.3.3.1 目的片段的扩增 | 第46-47页 |
| 4.3.3.2 Gateway入门载体的构建 | 第47页 |
| 4.3.3.3 pSPYNE/pSPYCEBiFC载体的构建 | 第47页 |
| 4.3.4 OsAAA1N与WRKY68的BiFC验证 | 第47-48页 |
| 4.4 实验结果 | 第48-56页 |
| 4.4.1 水稻OsAAA1基因酵母双杂交载体的构建 | 第48-51页 |
| 4.4.1.1 OsAAA1点对点验证载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.4.1.2 OsAAA1核文库筛选诱饵载体的构建 | 第49-51页 |
| 4.4.1.2.1 OsAAA1的全长、N端和C端的扩增 | 第49页 |
| 4.4.1.2.2 OsAAA1的全长、N端和C端Gateway入门载体的构建 | 第49-50页 |
| 4.4.1.2.3 诱饵载体pDEST32-OsAAA1F/N/C载体的构建 | 第50-51页 |
| 4.4.2 OsAAA1点对点互作蛋白的筛选 | 第51-52页 |
| 4.4.3 OsAAA1及其互作蛋白的BiFC载体构建 | 第52-55页 |
| 4.4.3.1 目的片段的扩增 | 第52页 |
| 4.4.3.2 WRKY68与Pit的Gateway入门载体构建 | 第52-54页 |
| 4.4.3.3 入门载体与pSPYNE/pSPYCE重组载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.4.4 OsAAA1N与WRKY68互作的BiFC验证 | 第55-56页 |
| 4.5 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第64-65页 |
| 参与的科研课题 | 第65页 |
| 参与的学术会议 | 第65页 |
