| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第5-12页 |
| 绪论 | 第12-28页 |
| 一、课题研究背景 | 第12页 |
| 二、生物燃料乙醇概述 | 第12-17页 |
| (一) 生物燃料乙醇简介 | 第12-13页 |
| (二) 国外生物燃料乙醇的发展概况 | 第13-14页 |
| (三) 国内生物燃料乙醇的发展概况 | 第14-15页 |
| (四) 生物燃料乙醇的生产菌株 | 第15-17页 |
| 三、酿酒酵母育种技术综述 | 第17-23页 |
| (一) 传统育种技术 | 第18-19页 |
| (二) 原生质体融合技术 | 第19-20页 |
| (三) 基因工程育种技术 | 第20-22页 |
| (四) 代谢工程育种技术 | 第22-23页 |
| (五) 基因组改组技术 | 第23页 |
| 四、酿酒酵母甘油磷酸脱氢酶研究进展 | 第23-26页 |
| 五、课题研究目的与内容 | 第26-28页 |
| (一) 课题研究目的 | 第26页 |
| (二) 课题研究内容 | 第26-28页 |
| 第一章 酿酒酵母GPD1基因敲除组件的构建 | 第28-46页 |
| 1.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 1.1.1 菌种与载体 | 第28-29页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第29页 |
| 1.1.3 培养基的配制 | 第29-30页 |
| 1.1.4 溶液与试剂的配制 | 第30-31页 |
| 1.1.5 主要仪器设备 | 第31页 |
| 1.2 实验方法 | 第31-37页 |
| 1.2.1 敲除组件引物的设计 | 第31-32页 |
| 1.2.2 酿酒酵母基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 1.2.3 质粒pUG6和pSH65的提取 | 第33-35页 |
| 1.2.4 敲除组件R1-R2的构建 | 第35-37页 |
| 1.3 结果与分析 | 第37-45页 |
| 1.3.1 酿酒酵母基因组DNA提取结果 | 第37-38页 |
| 1.3.2 质粒pUG6和pSH65的提取与验证 | 第38-40页 |
| 1.3.3 敲除组件R1-R2的扩增结果 | 第40-41页 |
| 1.3.4 敲除组件R1-R2菌落PCR结果 | 第41页 |
| 1.3.5 重组质粒pMD19-R1-R2酶切结果 | 第41-42页 |
| 1.3.6 敲除组件R1-R2测序结果 | 第42-45页 |
| 1.4 本章小结 | 第45-46页 |
| 第二章 酿酒酵母GPD1基因敲除研究 | 第46-68页 |
| 2.1 实验材料 | 第46-49页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第46-47页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第47页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第47-48页 |
| 2.1.4 溶液与试剂的配制 | 第48-49页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第49页 |
| 2.2 实验方法 | 第49-58页 |
| 2.2.1 基因敲除验证的引物设计 | 第49-50页 |
| 2.2.2 敲除GPD1第一条等位基因 | 第50-52页 |
| 2.2.3 敲除GPD1第二条等位基因 | 第52页 |
| 2.2.4 突变菌株GY01生长和发酵特性分析 | 第52-58页 |
| 2.3 结果与分析 | 第58-67页 |
| 2.3.1 敲除GPD1第一条等位基因 | 第58-61页 |
| 2.3.2 敲除GPD1第二条等位基因 | 第61-62页 |
| 2.3.3 酿酒酵母Y01与GY01生长曲线测定 | 第62-63页 |
| 2.3.4 实时荧光定量PCR测定GPD1基因表达 | 第63-65页 |
| 2.3.5 酿酒酵母Y01与GY01发酵残糖测定 | 第65-66页 |
| 2.3.6 酿酒酵母Y01与GY01甘油产量测定 | 第66页 |
| 2.3.7 酿酒酵母Y01与GY01乙醇产量测定 | 第66-67页 |
| 2.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第三章 酿酒酵母GPD2基因沉默研究 | 第68-86页 |
| 3.1 实验材料 | 第68-70页 |
| 3.1.1 菌种与质粒 | 第68-69页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第69页 |
| 3.1.3 培养基的配制 | 第69页 |
| 3.1.4 溶液与试剂的配制 | 第69-70页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第70页 |
| 3.2 实验方法 | 第70-73页 |
| 3.2.1 PCR扩增引物的设计 | 第70页 |
| 3.2.2 沉默组件SGPD2的扩增、克隆及测序 | 第70-71页 |
| 3.2.3 沉默表达载体pUPT-SGPD2的构建 | 第71-72页 |
| 3.2.4 沉默表达载体pUPT-SGPD2的转化及验证 | 第72页 |
| 3.2.5 突变菌株SGY01生长和发酵特性分析 | 第72-73页 |
| 3.3 结果与分析 | 第73-84页 |
| 3.3.1 沉默组件SGPD2扩增和测序结果 | 第73-74页 |
| 3.3.2 质粒pUPST的提取和鉴定 | 第74-75页 |
| 3.3.3 沉默表达载体pUPT-SGPD2构建和验证 | 第75-77页 |
| 3.3.4 基因沉默转化子的鉴定 | 第77-79页 |
| 3.3.5 酿酒酵母Y01、GY01和SGY01生长曲线测定 | 第79页 |
| 3.3.6 实时荧光定量PCR测定GPD2基因表达 | 第79-81页 |
| 3.3.7 酿酒酵母Y01、GY01和SGY01发酵残糖测定 | 第81-82页 |
| 3.3.8 酿酒酵母Y01、GY01和SGY01甘油产量测定 | 第82-83页 |
| 3.3.9 酿酒酵母Y01、GY01和SGY01乙醇产量测定 | 第83-84页 |
| 3.4 本章小结 | 第84-86页 |
| 第四章 结论与展望 | 第86-88页 |
| 4.1 本文结论 | 第86-87页 |
| 4.2 研究展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-94页 |
| 附录1 主要符号缩略表 | 第94-96页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第96-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
| 个人简历 | 第100-104页 |
