| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 生物质的资源化利用 | 第12-13页 |
| 1.2 嗜热菌在生物燃料生产过程中的应用 | 第13-18页 |
| 1.2.1 常用的乙醇代谢工程菌 | 第13-15页 |
| 1.2.2 嗜热菌的应用 | 第15-18页 |
| 1.3 丙酮酸代谢途径 | 第18-21页 |
| 1.3.1 丙酮酸代谢途径及其关键酶 | 第18-19页 |
| 1.3.2 丙酮酸铁氧化还原酶的来源 | 第19页 |
| 1.3.3 丙酮酸铁氧化还原酶的结构 | 第19-20页 |
| 1.3.4 丙酮酸铁氧化还原酶的酶学性质 | 第20-21页 |
| 1.3.5 丙酮酸铁氧化还原酶的生理功能 | 第21页 |
| 1.4 丙酮酸铁氧化还原酶的应用现状 | 第21-23页 |
| 1.5 本课题的研究内容和意义 | 第23-24页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第23页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第23-24页 |
| 第二章 Thermotoga neapolitana来源的丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因的克隆.. | 第24-38页 |
| 2.1 前言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌种 | 第24页 |
| 2.2.2 实验用药品 | 第24页 |
| 2.2.3 实验用分子试剂 | 第24页 |
| 2.2.4 实验用酶 | 第24-25页 |
| 2.2.5 实验溶液 | 第25页 |
| 2.2.6 实验用培养基 | 第25-26页 |
| 2.2.7 实验仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-35页 |
| 2.3.1 Thermotoga neapolitana(DSM4359)基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.3.2 引物设计及合成 | 第27-28页 |
| 2.3.3 目的基因片段PCR扩增 | 第28-30页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.3.5 DNA酶切反应 | 第31-32页 |
| 2.3.6 重组质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.7 连接产物纯化 | 第33页 |
| 2.3.8 大肠杆菌感受态的制备及重组质粒的转化 | 第33-34页 |
| 2.3.9 原核细胞质粒提取 | 第34-35页 |
| 2.3.10 重组转化子验证 | 第35页 |
| 2.4 结果与分析 | 第35-37页 |
| 2.4.1 丙酮酸铁氧化还原蛋白酶基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.4.2 重组质粒的构建结果 | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 丙酮酸铁氧化还原蛋白酶(PFOR)的分离纯化及酶学活性研究 | 第38-52页 |
| 3.1 前言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-39页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 主要试剂与仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.3 培养基 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-45页 |
| 3.3.1 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.3.2 蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE分析检测 | 第41-42页 |
| 3.3.4 酶活测定 | 第42-43页 |
| 3.3.5 蛋白定量 | 第43-44页 |
| 3.3.6 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶最适pH的测定 | 第44页 |
| 3.3.7 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶最适反应温度的测定 | 第44页 |
| 3.3.8 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶pH稳定性的测定 | 第44页 |
| 3.3.9 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶温度稳定性的测定 | 第44-45页 |
| 3.3.10 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶氧敏感性的测定 | 第45页 |
| 3.3.11 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的底物特异性研究 | 第45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-51页 |
| 3.4.1 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶表达 | 第45页 |
| 3.4.2 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| 3.4.3 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶纯化结果 | 第46页 |
| 3.4.4 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的最适反应pH | 第46-47页 |
| 3.4.5 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的最适反应温度 | 第47页 |
| 3.4.6 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的pH稳定性 | 第47-48页 |
| 3.4.7 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的温度稳定性 | 第48页 |
| 3.4.8 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的氧敏感性 | 第48-49页 |
| 3.4.9 重组丙酮酸铁氧化还原蛋白酶的底物特异性 | 第49页 |
| 3.4.10 PFORα,PFORαβγ,PFORαβδ,PFORαγδ的表达和特性分析 | 第49-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 丙酮酸铁氧化还原蛋白酶合成乙酰辅酶A | 第52-58页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验用药品 | 第52页 |
| 4.2.2 实验用溶液 | 第52-53页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 反应合成乙酰辅酶A | 第53页 |
| 4.3.2 HPLC法分析反应后的产物 | 第53-54页 |
| 4.3.3 温度对乙酰辅酶A合成速率的影响 | 第54页 |
| 4.3.4 pH对乙酰辅酶A合成速率的影响 | 第54页 |
| 4.3.5 丙酮酸钠浓度对乙酰辅酶A合成速率的影响 | 第54-55页 |
| 4.4 结果与分析 | 第55-57页 |
| 4.4.1 重组PFOR酶合成乙酰辅酶A | 第55页 |
| 4.4.2 温度对乙酰辅酶A合成速率的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.3 pH对乙酰辅酶A合成速率的影响 | 第56页 |
| 4.4.4 丙酮酸钠对乙酰辅酶A合成速率的影响 | 第56-57页 |
| 4.5 本章小结 | 第57-58页 |
| 第五章 全文总结 | 第58-60页 |
| 5.1 结论 | 第58页 |
| 5.2 创新点 | 第58页 |
| 5.3 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第72页 |
