| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-18页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-16页 |
| 1.1.1 胰腺癌 | 第13页 |
| 1.1.2 长链非编码RNA | 第13-15页 |
| 1.1.3 UCA1 | 第15页 |
| 1.1.4 Hippo通路 | 第15-16页 |
| 1.2 本研究的目的、内容与技术路线 | 第16-18页 |
| 1.2.1 研究目的 | 第16页 |
| 1.2.2 研究内容 | 第16页 |
| 1.2.3 技术路线 | 第16-18页 |
| 第二章 UCA1通过Hippo通路调节胰腺癌细胞的迁移和侵袭 | 第18-36页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第18-22页 |
| 2.1.1 细胞和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验耗材 | 第19页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.5 常用试剂的配制 | 第20-22页 |
| 2.2 主要实验方法及步骤 | 第22-31页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 sh-UCA1质粒构建 | 第23-25页 |
| 2.2.3 过表达质粒转染 | 第25页 |
| 2.2.4 病毒包装 | 第25-26页 |
| 2.2.5 干扰稳转细胞筛选 | 第26页 |
| 2.2.6 总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.7 Real-timePCR检测方法 | 第27-28页 |
| 2.2.8 免疫印迹(Westernblot)检测方法 | 第28-31页 |
| 2.3 数据处理与统计方法 | 第31页 |
| 2.4 结果 | 第31-34页 |
| 2.4.1 菌液PCR鉴定sh-UCA1质粒 | 第31-32页 |
| 2.4.2 检测UCA1对胰腺癌Hippo信号通路相关蛋白的影响 | 第32-34页 |
| 2.5 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 UCA1与Hippo通路相互作用的分子机制 | 第36-47页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第36-37页 |
| 3.1.1 细胞和质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 实验耗材 | 第36-37页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第37页 |
| 3.1.5 常用试剂的配制 | 第37页 |
| 3.2 主要实验方法及步骤 | 第37-40页 |
| 3.2.1 pSL-MS2-12X-UCA1质粒的构建 | 第37-38页 |
| 3.2.2 点突变 | 第38-39页 |
| 3.2.3 细胞培养、细胞转染 | 第39页 |
| 3.2.4 RNA免疫共沉淀(RIP) | 第39-40页 |
| 3.3 数据处理与统计方法 | 第40-41页 |
| 3.4 结果 | 第41-45页 |
| 3.4.1 UCA1质粒和pSL-MS2-12X质粒双酶切产物胶回收 | 第41页 |
| 3.4.2 菌液PCR鉴定pSL-MS2-12X-UCA1质粒 | 第41-42页 |
| 3.4.3 PCR鉴定UCA1突变产物 | 第42-43页 |
| 3.4.4 检测UCA1与Hippo信号通路相关蛋白结合情况 | 第43-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 UCA1对YAP磷酸化、核定位和活性的影响 | 第47-56页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第47-49页 |
| 4.1.1 细胞和质粒 | 第47页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第47页 |
| 4.1.3 实验耗材 | 第47-48页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第48页 |
| 4.1.5 常用试剂的配制 | 第48-49页 |
| 4.2 主要实验方法及步骤 | 第49-51页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第49页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第49页 |
| 4.2.3 Westernblot检测方法 | 第49页 |
| 4.2.4 核浆分离检测方法 | 第49-50页 |
| 4.2.5 免疫荧光检测方法 | 第50-51页 |
| 4.2.6 荧光素酶报告基因检测 | 第51页 |
| 4.3 数据处理与统计方法 | 第51-52页 |
| 4.4 结果 | 第52-54页 |
| 4.4.1 分别检测UCA1-wt和UCA1-mut对胰腺癌Hippo通路相关蛋白的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.2 分别检测UCA1-wt和UCA1-mut对YAP亚细胞定位的影响 | 第53页 |
| 4.4.3 分别检测UCA1-wt和UCA1-mut对YAP转录活性的影响 | 第53-54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 主要结论和展望 | 第56-58页 |
| 5.1 主要结论 | 第56页 |
| 5.2 工作展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 综述 | 第64-73页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第74页 |
