| 缩写词表 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| 英文摘要 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 1 影响裂殖酵母细胞极性生长的主要因素 | 第15-19页 |
| 1.1 Cdc42信号通路在极性生长中的作用 | 第15-16页 |
| 1.2 微管骨架对极性生长的影响 | 第16-17页 |
| 1.3 肌动蛋白骨架对极性生长的影响 | 第17-18页 |
| 1.4 依赖于细胞膜的信号通路与细胞的极性生长 | 第18-19页 |
| 2 裂殖酵母中CLIP-170的同源蛋白Tip1 | 第19-20页 |
| 3 裂殖酵母Dma1与细胞极性生长之间的潜在联系 | 第20-21页 |
| 3.1 裂殖酵母Dma1 | 第20页 |
| 3.2 裂殖酵母Dma1与细胞极性生长之间的潜在联系 | 第20-21页 |
| 4 裂殖酵母CKI激酶Hhp2与细胞极性生长之间的潜在联系 | 第21-23页 |
| 4.1 裂殖酵母CKI激酶同源蛋白Hhp1和Hhp2 | 第21-23页 |
| 4.2 裂殖酵母Hhp2激酶与细胞极性生长之间的潜在联系 | 第23页 |
| 5 本论文的研究目的、内容和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料和方法 | 第25-56页 |
| 1 材料 | 第25-46页 |
| 1.1 大肠杆菌菌株 | 第25页 |
| 1.2 酵母菌株 | 第25-30页 |
| 1.3 质粒 | 第30-32页 |
| 1.4 引物 | 第32-36页 |
| 1.5 分子生物学工具酶 | 第36页 |
| 1.6 主要试剂及耗材 | 第36-37页 |
| 1.7 主要仪器及设备 | 第37-39页 |
| 1.8 常用培养基以及主要缓冲液的配制 | 第39-46页 |
| 2 方法 | 第46-56页 |
| 2.1 裂殖酵母菌株的构建 | 第46-47页 |
| 2.2 裂殖酵母基因组的提取—玻璃珠破碎法 | 第47页 |
| 2.3 裂殖酵母细胞的转化 | 第47-48页 |
| 2.4 质粒DNA的制备 | 第48-50页 |
| 2.5 琼脂糖胶回收DNA片段 | 第50页 |
| 2.6 PCR产物纯化回收 | 第50页 |
| 2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| 2.8 质粒DNA的细菌转化 | 第51页 |
| 2.9 常规PCR | 第51-52页 |
| 2.10 定点诱变PCR | 第52页 |
| 2.11 DNA限制性内切酶酶切反应 | 第52-53页 |
| 2.12 DNA的连接 | 第53页 |
| 2.13 检测细胞体内Tip1泛素化的菌株(含tip1-6HA)的处理 | 第53页 |
| 2.14 免疫共沉淀(co-IP) | 第53-54页 |
| 2.15 免疫印迹检测(Western blot) | 第54-55页 |
| 2.16 酵母细胞Calcofluor染色 | 第55页 |
| 2.17 裂殖酵母细胞的饥饿处理 | 第55页 |
| 2.18 nmt启动子驱动的基因表达 | 第55-56页 |
| 第三章 实验结果和分析 | 第56-75页 |
| 1 Tip1的C端245-461可以与Dma1相互作用 | 第56-57页 |
| 2 Dma1通过调控Tip1来调控指数生长期细胞的极性生长 | 第57-59页 |
| 3 Dma1通过调控Tip1来调控饥饿处理细胞的极性生长 | 第59-63页 |
| 4 寻找可以通过磷酸化Tip1进而影响Dma1和Tip1间相互作用的激酶以及相应的磷酸化位点 | 第63-67页 |
| 5 Hhp2参与调控细胞的极性生长 | 第67页 |
| 6 裂殖酵母Hhp2和Tip1在细胞端部存在相互作用 | 第67-69页 |
| 7 Hhp2参与调控Tip1的泛素化 | 第69-72页 |
| 8 寻找可以泛素化被Hhp2磷酸化的Tip1的其他潜在的E3泛素连接酶 | 第72-75页 |
| 第四章 讨论 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-90页 |
| 1 不同强度启动子驱动的Dma1的表达量的检测 | 第84页 |
| 2 野生型Dma1和带有突变的Dma1的蛋白水平比较 | 第84-85页 |
| 3 Hhp2的潜在磷酸化位点突变后对Tip1泛素化以及主带的影响 | 第85-87页 |
| 4 裂殖酵母细胞在不同的培养条件下,Tip1的泛素化水平以及蛋白水平会有差异,并且细胞的极性生长情况也会表现出差异 | 第87-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
