| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-19页 |
| 1.1 纤维素酶概述 | 第10-11页 |
| 1.2 β-葡萄糖苷酶概述 | 第11-16页 |
| 1.2.1 嗜热真菌中的β-葡萄糖苷酶 | 第12-13页 |
| 1.2.2 不同嗜热真菌中β-葡萄糖苷酶的系统进化树 | 第13-14页 |
| 1.2.3 嗜热真菌中β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达 | 第14-15页 |
| 1.2.4 β-葡萄糖苷酶基因的调控 | 第15-16页 |
| 1.3 RNA干扰在丝状真菌中的应用 | 第16页 |
| 1.4 One-Step-SLIC技术的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 本论文研究内容及意义 | 第17-19页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基及试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.4 寡核苷酸引物 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 嗜热毁丝霉的培养及保种 | 第24页 |
| 2.2.2 嗜热毁丝霉基因组提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 质粒DNA提取 | 第25页 |
| 2.2.4 质粒载体转化 | 第25页 |
| 2.2.5 Mtbglr过表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.2.6 Mt-siRNA-bglr干扰载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.7 嗜热毁丝霉原生质体制备与转化 | 第28-29页 |
| 2.2.8 嗜热毁丝霉RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.9 RT-qPCR | 第30-31页 |
| 2.2.10 酶活测定 | 第31-35页 |
| 第3章 实验结果 | 第35-49页 |
| 3.1 Mtbglr基因过表达的结果 | 第35-44页 |
| 3.1.1 Mtbglr过表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.1.2 Mtbglr过表达重组菌株的获得与筛选 | 第37-39页 |
| 3.1.3 纤维二糖(1%)诱导条件下纤维素酶活性分析 | 第39-40页 |
| 3.1.4 微晶纤维素(2%)诱导条件下纤维素酶活性分析.. | 第40-41页 |
| 3.1.5 玉米芯粉(2%)诱导条件下纤维素酶活性分析 | 第41-42页 |
| 3.1.6 玉米芯粉(1%)诱导条件下纤维素酶活性分析 | 第42-43页 |
| 3.1.7 过表达Mtbglr对嗜热毁丝霉主要纤维素酶基因表达量的影响 | 第43-44页 |
| 3.2 Mtbglr基因干扰的实验结果 | 第44-49页 |
| 3.2.1 Mt-siRNA-bglr干扰质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2 Mt-siRNA-bglr干扰重组菌株的获得与筛选 | 第45-46页 |
| 3.2.3 玉米芯粉(1%)诱导条件下纤维素酶活性分析 | 第46页 |
| 3.2.4 干扰Mtbglr对嗜热毁丝霉主要纤维素酶基因表达量的影响 | 第46-49页 |
| 第4章 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 实验方法方面的讨论 | 第49页 |
| 4.1.1 One-Step-SLIC技术 | 第49页 |
| 4.1.2 RNA干扰技术的不确定性与脱靶效应 | 第49页 |
| 4.2 过表达Mtbglr对纤维素酶酶活及基因表达的调控分析. | 第49-51页 |
| 4.3 干扰Mtbglr对纤维素酶酶活及基因表达的调控分析 | 第51-52页 |
| 4.4 关于嗜热真菌的讨论 | 第52-53页 |
| 第5章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第68页 |
