| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-27页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 生物丁醇 | 第9-10页 |
| 1.3 E.coli丁醇耐受机制及耐受菌选育 | 第10-17页 |
| 1.3.1 丁醇耐受机制及基因工程策略构建耐受菌 | 第10-13页 |
| 1.3.2 定向进化策略筛选丁醇耐受菌株 | 第13-15页 |
| 1.3.3 组合策略构建丁醇耐受菌株 | 第15页 |
| 1.3.4 化学修饰策略提高菌株的丁醇耐受性 | 第15-17页 |
| 1.4 高产丁醇E.coli菌株的构建 | 第17-22页 |
| 1.4.1 产丁醇菌株的构建 | 第17-18页 |
| 1.4.2 丁醇合成途径酶的优化 | 第18-19页 |
| 1.4.3 增强丁醇生产驱动力 | 第19-20页 |
| 1.4.4 增强丁醇耐受性以提高产量 | 第20页 |
| 1.4.5 异源途径酶基因的共定位 | 第20-21页 |
| 1.4.6 其它丁醇代谢途径 | 第21页 |
| 1.4.7 整合策略 | 第21页 |
| 1.4.8 优化发酵方法 | 第21-22页 |
| 1.5 大肠杆菌CRISPR-Cas基因组编辑技术 | 第22-24页 |
| 1.6 本课题的提出及意义 | 第24-27页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第27-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-39页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与引物 | 第27-37页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第37页 |
| 2.1.3 试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.4 溶液及培养基 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-57页 |
| 2.2.1 BW1847和BW1857突变株在高浓度丁醇胁迫下的生长评价 | 第39页 |
| 2.2.2 PCR体系及反应程序 | 第39-42页 |
| 2.2.3 突变株BW1857全基因组重测序及突变基因的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.4 BW1857中突变基因的功能互补实验 | 第44-45页 |
| 2.2.5 BW1857中14 kb缺失片段中各基因的功能鉴定 | 第45-50页 |
| 2.2.6 高耐受丁醇菌株构建 | 第50-53页 |
| 2.2.7 产丁醇E.coli的构建 | 第53-57页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第57-79页 |
| 3.1 BW1847和BW1857在高浓度丁醇胁迫下的耐受能力 | 第57-58页 |
| 3.2 BW1857中突变基因和缺失片段功能基因鉴定 | 第58-71页 |
| 3.2.1 BW1857突变基因鉴定 | 第58-60页 |
| 3.2.2 BW1857中突变基因的功能互补实验 | 第60-63页 |
| 3.2.3 BW1857中14 kb大片段的缺失对丁醇耐受功能的影响 | 第63-71页 |
| 3.2.4 BW1857突变株丁醇耐受功能基因鉴定小结 | 第71页 |
| 3.3 高耐受丁醇菌株构建 | 第71-79页 |
| 3.3.1 acrB缺失和rob点突变组合对菌株丁醇耐受性的影响 | 第71-72页 |
| 3.3.2 热激蛋白GroESL表达量对菌株丁醇耐受性的影响 | 第72-74页 |
| 3.3.3 基因tqsA缺失对菌株丁醇耐受性的影响 | 第74页 |
| 3.3.4 调节因子Fur缺失对菌株丁醇耐受性的影响 | 第74-75页 |
| 3.3.5 敲除astE基因并整合feoA基因对菌株丁醇耐受性的影响 | 第75-77页 |
| 3.3.6 高耐丁醇菌株构建小结 | 第77-79页 |
| 第4章 结论与展望 | 第79-81页 |
| 4.1 结论 | 第79页 |
| 4.2 创新点 | 第79页 |
| 4.3 展望 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
