| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略表 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| 1.1 禽流感的流行近况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 H5亚型AI的流行近况 | 第14-15页 |
| 1.1.2 H9亚型AI的流行近况 | 第15-16页 |
| 1.2 禽流感的公共卫生意义 | 第16-17页 |
| 1.3 禽流感疫苗的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.3.1 我国禽流感疫苗使用现状 | 第17-19页 |
| 1.3.2 不同类型疫苗比较 | 第19-20页 |
| 1.4 DNA疫苗 | 第20-24页 |
| 1.4.1 DNA疫苗的免疫应答机制 | 第21-22页 |
| 1.4.2 DNA疫苗诱导的IFN-γ 和TNF-α | 第22-23页 |
| 1.4.3 影响DNA疫苗免疫效果的因素 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第一章 HA基因密码子优化对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响 | 第25-48页 |
| 1 材料与方法 | 第25-33页 |
| 1.1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1.1 病毒、阳性血清和抗原 | 第25页 |
| 1.1.2 载体质粒 | 第25页 |
| 1.1.3 SPF鸡 | 第25页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.5 主要仪器和设备 | 第26页 |
| 1.2 方法 | 第26-33页 |
| 1.2.1 H5亚型AIV的HA基因的获取 | 第26-28页 |
| 1.2.2 H5亚型AIV的HA基因的优化 | 第28页 |
| 1.2.3 重组质粒p CAGGKHA5和p CAGGKopti HA5构建及抽提 | 第28-30页 |
| 1.2.4 重组质粒p CAGGKHA5和p CAGGKopti HA5的体外表检测达 | 第30-31页 |
| 1.2.5 H5亚型AIV油乳剂灭活苗的制备 | 第31页 |
| 1.2.6 SPF鸡的免疫 | 第31页 |
| 1.2.7 HI抗体检测 | 第31-32页 |
| 1.2.8 细胞因子IFN-γ 和TNF-α 的检测 | 第32页 |
| 1.2.9 攻毒试验 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-45页 |
| 2.1 H5亚型AIV的HA基因的RT-PCR扩增结果 | 第33页 |
| 2.2 H5亚型AIV的HA基因的密码子优化结果 | 第33-36页 |
| 2.3 重组质粒p CAGGKHA5和p CAGGKopti HA5的构建和鉴定 | 第36-38页 |
| 2.4 重组质粒p CAGGKHA5和p CAGGKopti HA5体外表达结果 | 第38-40页 |
| 2.4.1 间接免疫荧光检测结果 | 第38-39页 |
| 2.4.2 Western blot检测结果分析 | 第39-40页 |
| 2.5 HI抗体检测结果 | 第40-41页 |
| 2.6 细胞因子IFN-γ 和TNF-α 的变化 | 第41-43页 |
| 2.7 攻毒试验结果 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| 第二章 HA基因密码子优化对H9亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响 | 第48-65页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1.1 材料 | 第48页 |
| 1.1.1 病毒、阳性血清和抗原 | 第48页 |
| 1.1.2 疫苗质粒 | 第48页 |
| 1.1.3 SPF鸡 | 第48页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第48页 |
| 1.1.5 主要仪器设备 | 第48页 |
| 1.2 方法 | 第48-50页 |
| 1.2.1 H9亚型AIV的HA基因的获取 | 第48-49页 |
| 1.2.2 H9亚型AIV的HA基因的优化 | 第49页 |
| 1.2.3 重组质粒p CAGGHA9和p CAGGopti HA9的构建及抽提 | 第49页 |
| 1.2.4 重组质粒p CAGGHA9和p CAGGopti HA9的体外蛋白表达检测 | 第49页 |
| 1.2.5 H9亚型AIV油乳剂灭活苗的制备 | 第49页 |
| 1.2.6 SPF鸡的免疫 | 第49-50页 |
| 1.2.7 HI抗体检测 | 第50页 |
| 1.2.8 细胞因子IFN-γ 和TNF-α 的检测 | 第50页 |
| 1.2.9 攻毒 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-62页 |
| 2.1 H9亚型AIV的HA基因RT-PCR扩增结果 | 第50-51页 |
| 2.2 H9亚型AIV的HA基因密码子优化结果 | 第51-54页 |
| 2.3 重组质粒p CAGGHA9和p CAGGopti HA9的构建和鉴定 | 第54-56页 |
| 2.4 重组质粒p CAGGHA9和p CAGGopti HA9体外蛋白表达检测结果 | 第56-57页 |
| 2.4.1 间接免疫荧光检测结果 | 第56-57页 |
| 2.4.2 Western blot蛋白表达检测分析 | 第57页 |
| 2.5 HI抗体检测结果 | 第57-58页 |
| 2.6 细胞因子IFN-γ 和TNF-α 的变化 | 第58-60页 |
| 2.7 攻毒试验结果 | 第60-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-79页 |
| 附录1 | 第79页 |
