| 中文摘要 | 第4-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.贯叶金丝桃与金丝桃素 | 第12-20页 |
| 1.1 贯叶金丝桃形态特征 | 第12页 |
| 1.2 贯叶金丝桃野生资源分布 | 第12-13页 |
| 1.3 贯叶金丝桃化学成分 | 第13-15页 |
| 1.3.1 萘骈二蒽酮类化合物 | 第13页 |
| 1.3.2 黄酮类化合物 | 第13页 |
| 1.3.3 间苯三酚类 | 第13-14页 |
| 1.3.4 单宁类化合物 | 第14页 |
| 1.3.5 藤黄酚类衍生物 | 第14页 |
| 1.3.6 挥发油 | 第14页 |
| 1.3.7 酚羧酸类 | 第14页 |
| 1.3.8 香豆素类 | 第14页 |
| 1.3.9 类胡萝卜素类 | 第14-15页 |
| 1.3.10 其它化合物 | 第15页 |
| 1.4 金丝桃素的分子特性和药理作用 | 第15-19页 |
| 1.4.1 金丝桃素的分子结构和理化特性 | 第15-16页 |
| 1.4.2 金丝桃素的药理作用 | 第16-19页 |
| 1.5 贯叶金丝桃中金丝桃素等活性成分提取分离方法的研究 | 第19-20页 |
| 1.5.1 金丝桃素的提取分离方法 | 第19-20页 |
| 1.5.2 黄酮类成分的提取分离方法 | 第20页 |
| 2.胰岛细胞瘤 | 第20页 |
| 3.光动力学疗法 | 第20页 |
| 4.转录组测序 | 第20-22页 |
| 4.1 转录组及转录组学 | 第20-21页 |
| 4.2 转录组测序技术 | 第21页 |
| 4.3 转录组测序的应用及发展前景 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第22-33页 |
| 1.实验材料与器材 | 第22-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1.1 药材提取物 | 第22页 |
| 1.1.2 试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.3 质粒及细胞系 | 第23页 |
| 1.2 试剂配制 | 第23-24页 |
| 1.2.1 细胞培养试剂 | 第23页 |
| 1.2.2 活细胞染色试剂 | 第23页 |
| 1.2.3 质粒提取试剂 | 第23页 |
| 1.2.4 免疫荧光试剂 | 第23-24页 |
| 1.2.5 免疫印记试剂 | 第24页 |
| 1.3 仪器 | 第24-25页 |
| 1.3.1 中药化学相关仪器 | 第24-25页 |
| 1.3.2 分子生物学相关仪器 | 第25页 |
| 1.3.3 细胞生物学相关仪器 | 第25页 |
| 2.实验方法 | 第25-33页 |
| 2.1 金丝桃素的制备 | 第25-27页 |
| 2.1.1 贯叶金丝桃提取物的薄层考察 | 第25页 |
| 2.1.2 分配系数的测定 | 第25页 |
| 2.1.3 金丝桃素的硅胶柱层析初步分离 | 第25-26页 |
| 2.1.4 高速逆流色谱分离 | 第26页 |
| 2.1.5 高效液相色谱法分析检测 | 第26页 |
| 2.1.6 化合物的化学结构鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2 金丝桃素对细胞活力的影响检测 | 第27页 |
| 2.2.1 细胞的复苏 | 第27页 |
| 2.2.2 细胞的传代培养 | 第27页 |
| 2.2.3 MTT分析 | 第27页 |
| 2.3 金丝桃素在细胞中分布的观察 | 第27-29页 |
| 2.3.1 活细胞激光共聚焦拍摄 | 第27页 |
| 2.3.2 活细胞荧光标记 | 第27-28页 |
| 2.3.3 质粒扩增 | 第28页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第28页 |
| 2.3.5 金丝桃素在细胞内定位分析 | 第28-29页 |
| 2.4 金丝桃素对细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
| 2.4.1 免疫荧光染色 | 第29页 |
| 2.4.2 流式细胞术检测 | 第29页 |
| 2.4.3 免疫印迹检测 | 第29-30页 |
| 2.5 金丝桃素对细胞凋亡的影响检测 | 第30-31页 |
| 2.5.1 DAPI染色 | 第30页 |
| 2.5.2 AnnexinV标记分析 | 第30-31页 |
| 2.6 金丝桃素对细胞基因表达影响的检测分析 | 第31-32页 |
| 2.6.1 细胞样本制备 | 第31页 |
| 2.6.2 RNA提取 | 第31页 |
| 2.6.3 文库构建 | 第31页 |
| 2.6.4 测序方法 | 第31页 |
| 2.6.5 数据分析 | 第31-32页 |
| 2.7 统计学分析 | 第32-33页 |
| 第三部分 实验结果 | 第33-61页 |
| 1.金丝桃素的分离与鉴定 | 第33-39页 |
| 1.1 贯叶金丝桃提取物的薄层考察 | 第33页 |
| 1.2 金丝桃素粗品的制备 | 第33-36页 |
| 1.3 高速逆流色谱法分离制备金丝桃素 | 第36-37页 |
| 1.4 金丝桃素的大量制备 | 第37页 |
| 1.5 金丝桃素的结构鉴定 | 第37-39页 |
| 2.金丝桃素对胰岛细胞瘤的抗肿瘤作用和机制的研究 | 第39-61页 |
| 2.1 金丝桃素抑制RINM5F细胞的细胞活力 | 第39-40页 |
| 2.2 金丝桃素在RINM5F细胞内的分布与定位 | 第40-43页 |
| 2.2.1 金丝桃素在活细胞内的动态分布 | 第40-41页 |
| 2.2.2 .金丝桃素的亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 2.2.3 .光照对金丝桃素在细胞内分布的影响 | 第42-43页 |
| 2.3 金丝桃素抑制RINM5F细胞增殖 | 第43-47页 |
| 2.3.1 金丝桃素抑制Ki67表达 | 第44-45页 |
| 2.3.2 金丝桃素诱导RINm5F细胞发生细胞周期阻滞 | 第45-46页 |
| 2.3.3 金丝桃素抑制JNK和ERK信号的活化 | 第46-47页 |
| 2.4 金丝桃素对RINM5F细胞凋亡的影响 | 第47-51页 |
| 2.4.1 金丝桃素诱导RINm5F细胞发生细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 2.4.2 金丝桃素促进AnnexinV与细胞膜的结合 | 第49-50页 |
| 2.4.3 金丝桃素促进线粒体途经相关的细胞凋亡蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 2.5 金丝桃素对RINM5F细胞基因表达的影响 | 第51-61页 |
| 2.5.1 RNA提取及cDNA文库构建 | 第51-53页 |
| 2.5.2 高通量测序结果 | 第53页 |
| 2.5.3 Cleanreads测序质量分析 | 第53-54页 |
| 2.5.4 基因组的覆盖度和特征分析 | 第54-55页 |
| 2.5.5 基因的差异表达分析 | 第55-56页 |
| 2.5.6 数据可靠性分析 | 第56-57页 |
| 2.5.7 DEG功能聚类结果分析 | 第57-61页 |
| 第四部分 讨论 | 第61-65页 |
| 1.金丝桃素光动力学效应抑制RINM5F细胞的细胞活力 | 第61页 |
| 2.金丝桃素积累在RINM5F细胞的细胞质和细胞核中 | 第61-62页 |
| 3.金丝桃素光动力学效应抑制RINM5F细胞增殖 | 第62页 |
| 4.金丝桃素光动力学效应抑制RINM5F细胞增殖的机制与MAPKS信号通路有关 | 第62页 |
| 5.金丝桃素光动力学效应诱导RINM5F细胞发生线粒体途径的凋亡 | 第62-63页 |
| 6.金丝桃素对RINm5F细胞基因表达的影响 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 英文缩略词表 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简介 | 第83-84页 |
| 在学期间公开发表的论文及著作情况 | 第84页 |
