| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| 1 番茄与番茄病毒病 | 第11页 |
| 2 TMV研究进展 | 第11-15页 |
| 2.1 TMV的生物学特征 | 第11-12页 |
| 2.2 TMV基因组的结构 | 第12-14页 |
| 2.3 TMV基因组编码蛋白及其功能 | 第14-15页 |
| 3 cDNA文库研究进展 | 第15-21页 |
| 3.1 cDNA文库简介 | 第15-16页 |
| 3.2 酵母双杂交系统研究进展 | 第16-21页 |
| 3.3 Easy Clone cDNA Library Construction系统 | 第21页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-32页 |
| 1 实验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第22页 |
| 1.2 番茄品种和毒源 | 第22页 |
| 1.3 培养基及抗生素 | 第22-23页 |
| 1.4 主要试剂及试剂盒 | 第23页 |
| 1.5 引物及其序列 | 第23-24页 |
| 1.6 生物信息学软件 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.0 番茄播种,TMV接种及叶片采集 | 第24页 |
| 2.1 植物叶片总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2 反转录 | 第25页 |
| 2.3 PCR | 第25页 |
| 2.4 克隆载体制备 | 第25页 |
| 2.5 连接 | 第25页 |
| 2.6 感受态制备及转化 | 第25-26页 |
| 2.7 质粒小量制备 | 第26页 |
| 2.8 质粒的酶切和PCR鉴定 | 第26页 |
| 2.9 序列测定与分析 | 第26页 |
| 2.10 分离mRNA | 第26-27页 |
| 2.11 cDNA I链合成 | 第27-28页 |
| 2.12 ds cDNA扩增循环数摸索 | 第28-29页 |
| 2.13 PCR扩增ds cDNA | 第29页 |
| 2.14 ds cDNA酶切及分段回收 | 第29页 |
| 2.15 文库载体制备 | 第29-30页 |
| 2.16 ds cDNA与文库载体连接 | 第30页 |
| 2.17 电转化感受态制备及电转化 | 第30页 |
| 2.18 电转化条件摸索及大量电转化 | 第30-31页 |
| 2.19 文库插入片段平均长度、重组率及库容量计算 | 第31页 |
| 2.20 文库收集与菌种保存 | 第31页 |
| 2.21 文库质粒的提取与保存 | 第31-32页 |
| 第三章 结果与分析 | 第32-49页 |
| 1 TMV贺州分离物全长基因组克隆与序列分析 | 第32-35页 |
| 1.1 TMV贺州分离物全长基因组克隆 | 第32-33页 |
| 1.2 TMV贺州分离物全长基因组序列分析 | 第33-35页 |
| 2 受TMV侵染番茄叶片酵母双杂交cDNA文库构建 | 第35-42页 |
| 2.1 番茄播种,TMV接种及叶片采集 | 第35-36页 |
| 2.2 总RNA提取及TMV检测 | 第36-37页 |
| 2.3 mRNA分离及cDNA I链合成 | 第37-38页 |
| 2.4 ds cDNA PCR扩增 | 第38页 |
| 2.5 ds cDNA酶切及分段回收 | 第38-39页 |
| 2.6 文库的构建与鉴定 | 第39-42页 |
| 2.7 小结 | 第42页 |
| 3 健康番茄叶片酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第42-49页 |
| 3.1 健康番茄叶片总RNA提取及mRNA分离 | 第42-44页 |
| 3.2 cDNA I链合成及ds cDNA扩增 | 第44-45页 |
| 3.3 ds cDNA酶切及分段回收 | 第45页 |
| 3.4 文库的构建与鉴定 | 第45-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录A TMV Hezhou Strain全长基因组cDNA序列 | 第57-61页 |
| 附录B 在读期间的其他研究工作 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
