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烟草花叶病毒全长基因组克隆与分析及受其侵染的番茄叶片酵母双杂交cDNA文库构建

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-7页
第一章 前言第11-22页
    1 番茄与番茄病毒病第11页
    2 TMV研究进展第11-15页
        2.1 TMV的生物学特征第11-12页
        2.2 TMV基因组的结构第12-14页
        2.3 TMV基因组编码蛋白及其功能第14-15页
    3 cDNA文库研究进展第15-21页
        3.1 cDNA文库简介第15-16页
        3.2 酵母双杂交系统研究进展第16-21页
        3.3 Easy Clone cDNA Library Construction系统第21页
    4 本研究的目的和意义第21-22页
第二章 材料与方法第22-32页
    1 实验材料第22-24页
        1.1 菌株与质粒第22页
        1.2 番茄品种和毒源第22页
        1.3 培养基及抗生素第22-23页
        1.4 主要试剂及试剂盒第23页
        1.5 引物及其序列第23-24页
        1.6 生物信息学软件第24页
    2 实验方法第24-32页
        2.0 番茄播种,TMV接种及叶片采集第24页
        2.1 植物叶片总RNA提取第24-25页
        2.2 反转录第25页
        2.3 PCR第25页
        2.4 克隆载体制备第25页
        2.5 连接第25页
        2.6 感受态制备及转化第25-26页
        2.7 质粒小量制备第26页
        2.8 质粒的酶切和PCR鉴定第26页
        2.9 序列测定与分析第26页
        2.10 分离mRNA第26-27页
        2.11 cDNA I链合成第27-28页
        2.12 ds cDNA扩增循环数摸索第28-29页
        2.13 PCR扩增ds cDNA第29页
        2.14 ds cDNA酶切及分段回收第29页
        2.15 文库载体制备第29-30页
        2.16 ds cDNA与文库载体连接第30页
        2.17 电转化感受态制备及电转化第30页
        2.18 电转化条件摸索及大量电转化第30-31页
        2.19 文库插入片段平均长度、重组率及库容量计算第31页
        2.20 文库收集与菌种保存第31页
        2.21 文库质粒的提取与保存第31-32页
第三章 结果与分析第32-49页
    1 TMV贺州分离物全长基因组克隆与序列分析第32-35页
        1.1 TMV贺州分离物全长基因组克隆第32-33页
        1.2 TMV贺州分离物全长基因组序列分析第33-35页
    2 受TMV侵染番茄叶片酵母双杂交cDNA文库构建第35-42页
        2.1 番茄播种,TMV接种及叶片采集第35-36页
        2.2 总RNA提取及TMV检测第36-37页
        2.3 mRNA分离及cDNA I链合成第37-38页
        2.4 ds cDNA PCR扩增第38页
        2.5 ds cDNA酶切及分段回收第38-39页
        2.6 文库的构建与鉴定第39-42页
        2.7 小结第42页
    3 健康番茄叶片酵母双杂交cDNA文库的构建第42-49页
        3.1 健康番茄叶片总RNA提取及mRNA分离第42-44页
        3.2 cDNA I链合成及ds cDNA扩增第44-45页
        3.3 ds cDNA酶切及分段回收第45页
        3.4 文库的构建与鉴定第45-48页
        3.5 小结第48-49页
第四章 总结与讨论第49-52页
参考文献第52-57页
附录A TMV Hezhou Strain全长基因组cDNA序列第57-61页
附录B 在读期间的其他研究工作第61-71页
致谢第71-72页
攻读学位期间发表论文情况第72页

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