| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 立题背景 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外相关研究进展 | 第12-18页 |
| 1.2.1 芦丁的生物活性及其在植物中的分布 | 第12-13页 |
| 1.2.1.1 芦丁的理化特征 | 第12页 |
| 1.2.1.2 芦丁生物活性 | 第12页 |
| 1.2.1.3 芦丁的分布 | 第12-13页 |
| 1.2.2 芦丁生物合成途径及相关酶类 | 第13-18页 |
| 1.2.2.1 公共苯丙氨酸途径涉及酶类及其编码基因 | 第14-16页 |
| 1.2.2.2 芦丁合成下游途径涉及酶类及其编码基因 | 第16-18页 |
| 1.3 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 研究内容 | 第19-20页 |
| 2.1 芦丁合成相关基因的克隆与序列分析 | 第19页 |
| 2.2 核桃内参基因实时荧光定量PCR表达稳定性评价 | 第19页 |
| 2.3 芦丁合成相关基因的空间表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第19页 |
| 2.4 芦丁合成相关基因的时间表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-30页 |
| 3.1 供试材料 | 第20页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 3.1.2 主要化学试剂 | 第20页 |
| 3.1.3 主要试验仪器设备 | 第20页 |
| 3.2 试验设计与样品处理 | 第20-22页 |
| 3.2.1 试验样品采集与处理 | 第20-21页 |
| 3.2.2 试验设计 | 第21-22页 |
| 3.2.2.1 铁核桃芦丁合成相关基因的克隆与序列分析 | 第21页 |
| 3.2.2.2 核桃内参基因实时荧光定量PCR表达稳定性评价 | 第21页 |
| 3.2.2.3 芦丁合成相关基因的空间表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第21-22页 |
| 3.2.2.4 芦丁合成相关基因的时间表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第22页 |
| 3.3 试验方法 | 第22-30页 |
| 3.3.1 多酚类物质的提取 | 第22页 |
| 3.3.2 总酚含量的测定 | 第22页 |
| 3.3.3 总黄酮含量的测定 | 第22-23页 |
| 3.3.4 芦丁含量的测定 | 第23页 |
| 3.3.5 酶活性的测定 | 第23页 |
| 3.3.6 铁核桃芦丁合成相关基因的克隆 | 第23-28页 |
| 3.3.6.1 铁核桃样品总RNA的提取(试剂盒法) | 第23-24页 |
| 3.3.6.2 总RNA质量检测 | 第24页 |
| 3.3.6.3 cDNA第一条链的合成 | 第24-25页 |
| 3.3.6.4 目的基因的克隆 | 第25-26页 |
| 3.3.6.5 RT-PCR产物的回收 | 第26-27页 |
| 3.3.6.6 cDNA片段的连接 | 第27页 |
| 3.3.6.7 连接产物的转化 | 第27页 |
| 3.3.6.8 连接产物菌落PCR验证 | 第27页 |
| 3.3.6.9 cDNA的测序 | 第27页 |
| 3.3.6.10 铁核桃芦丁合成相关基因的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3.3.7 核桃内参基因引物筛选与设计 | 第28页 |
| 3.3.8 铁核桃芦丁合成相关基因荧光定量检测及分析 | 第28-30页 |
| 3.3.8.1 引物设计 | 第28-29页 |
| 3.3.8.2 qRT-PCR扩增 | 第29-30页 |
| 3.3.9 试验数据处理方法 | 第30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-70页 |
| 4.1 铁核桃芦丁合成相关基因的克隆及生物信息学分析 | 第30-39页 |
| 4.1.1 铁核桃总RNA的提取与质量检测 | 第30页 |
| 4.1.2 铁核桃芦丁合成相关基因的RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| 4.1.3 铁核桃芦丁合成相关基因序列分析 | 第31-37页 |
| 4.1.4 铁核桃芦丁合成相关基因的生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 4.1.4.1 铁核桃芦丁合成相关基因的理化性质分析 | 第37-38页 |
| 4.1.4.2 铁核桃芦丁合成相关基因的亚细胞定位及磷酸化位点预测 | 第38页 |
| 4.1.4.3 铁核桃芦丁合成相关基因的二级结构预测 | 第38-39页 |
| 4.1.4.4 铁核桃芦丁合成相关基因的三级结构预测 | 第39页 |
| 4.2 核桃内参基因实时定量PCR表达稳定性评价 | 第39-44页 |
| 4.2.1 内参基因引物扩增特异性检测 | 第39-40页 |
| 4.2.2 内参基因的qRT-PCR熔解及扩增曲线分析 | 第40-41页 |
| 4.2.3 候选内参基因表达稳定性评价 | 第41-44页 |
| 4.3 铁核桃芦丁合成相关基因的空间表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第44-49页 |
| 4.3.1 铁核桃芦丁合成相关基因qTR-PCR引物检测 | 第44页 |
| 4.3.2 铁核桃不同组织中总酚、总黄酮及芦丁含量 | 第44-45页 |
| 4.3.3 铁核桃不同组织中芦丁合成相关酶活性的变化 | 第45-47页 |
| 4.3.4 铁核桃不同组织中芦丁合成相关基因表达量的变化 | 第47-49页 |
| 4.4 铁核桃芦丁合成相关基因的时间表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第49-67页 |
| 4.4.1 铁核桃叶片发育过程中相关基因的表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第49-54页 |
| 4.4.1.1 铁核桃叶片发育过程中总酚、总黄酮及芦丁含量 | 第49-50页 |
| 4.4.1.2 铁核桃叶片发育过程中芦丁合成相关酶活性的变化 | 第50-52页 |
| 4.4.1.3 铁核桃叶片发育过程中芦丁合成相关基因表达量的变化 | 第52-54页 |
| 4.4.2 铁核桃青皮发育过程中相关基因的表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第54-59页 |
| 4.4.2.1 铁核桃青皮发育过程中总酚、总黄酮及芦丁含量 | 第54-55页 |
| 4.4.2.2 铁核桃青皮发育过程中芦丁合成相关酶活性的变化 | 第55-56页 |
| 4.4.2.3 铁核桃青皮发育过程中芦丁合成相关基因表达量的变化 | 第56-59页 |
| 4.4.3 铁核桃膜质种皮发育过程相关基因的表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第59-63页 |
| 4.4.3.1 铁核桃膜质种皮发育过程中总酚、总黄酮及芦丁含量 | 第59页 |
| 4.4.3.2 铁核桃膜质种皮发育过程中芦丁合成相关酶活性的变化 | 第59-61页 |
| 4.4.3.3 铁核桃膜质种皮发育过程中芦丁合成相关基因表达量的变化 | 第61-63页 |
| 4.4.4 铁核桃子叶发育过程中相关基因的表达规律及其与芦丁合成的关系 | 第63-67页 |
| 4.4.4.1 铁核桃子叶发育过程中总酚及芦丁含量 | 第63-64页 |
| 4.4.4.2 铁核桃子叶发育过程中芦丁合成相关酶活性的变化 | 第64-65页 |
| 4.4.4.3 铁核桃子叶发育过程中芦丁合成相关基因表达量的变化 | 第65-67页 |
| 4.5 铁核桃叶片及果实发育过程中酚类物质含量与相关酶活性及相关基因表达量间的相关性 | 第67-70页 |
| 5 讨论与结论 | 第70-77页 |
| 5.1 讨论 | 第70-76页 |
| 5.1.1 铁核桃芦丁合成相关基因的克隆及序列分析 | 第70-71页 |
| 5.1.2 核桃内参基因实时荧光定量PCR表达稳定性评价 | 第71-72页 |
| 5.1.3 铁核桃总酚、总黄酮及芦丁的积累规律 | 第72-73页 |
| 5.1.4 铁核桃组织中酚类物质含量与相关酶活性及基因表达量间的关系 | 第73页 |
| 5.1.5 铁核桃叶片及果实发育过程中酚类物质含量与相关酶活性及基因表达间的关系. | 第73-76页 |
| 5.2 结论 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-86页 |
| 缩略词表 | 第86-87页 |
| 附图 | 第87-88页 |
| 附表 | 第88-91页 |
| 在读硕士期间发表的论文 | 第91-93页 |
