| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词及注解 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-25页 |
| 1.1 氨基糖苷类抗生素 | 第10-12页 |
| 1.1.1 氨基糖苷类抗生素的发现及副作用 | 第10页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素的分类 | 第10-11页 |
| 1.1.3 氨基糖苷类抗生素的耐药机制及相应对策 | 第11-12页 |
| 1.2 黑暗链霉菌 | 第12-17页 |
| 1.2.1 黑暗链霉菌简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 暗霉素复合物 | 第13页 |
| 1.2.3 黑暗链霉菌生物合成研究进展 | 第13-17页 |
| 1.3 红色链霉菌 | 第17-21页 |
| 1.3.1 红霉素 | 第17-18页 |
| 1.3.2 红霉素甲基化基因 | 第18-21页 |
| 1.4 金色链霉菌 | 第21-22页 |
| 1.4.1 金霉素 | 第21页 |
| 1.4.2 金霉素甲基化基因ctcK | 第21-22页 |
| 1.5 基因克隆与接合转移技术 | 第22-23页 |
| 1.6 选题依据 | 第23-24页 |
| 1.7 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第25-26页 |
| 2.1.2 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-39页 |
| 2.2.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第30-31页 |
| 2.2.2 DNA酶切反应 | 第31-32页 |
| 2.2.3 DNA酶连反应 | 第32页 |
| 2.2.4 DNA片段去磷酸化 | 第32-33页 |
| 2.2.5 DNA片段回收 | 第33页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第33-34页 |
| 2.2.7 碱裂解法提取质粒DNA(小量制备) | 第34页 |
| 2.2.8 菌种培养与保藏 | 第34-35页 |
| 2.2.9 链霉菌与小单孢菌基因组DNA提取 | 第35页 |
| 2.2.10 接合转移 | 第35-36页 |
| 2.2.11 摇瓶发酵 | 第36页 |
| 2.2.12 二剂量法测定抗生素效价 | 第36-37页 |
| 2.2.13 工程菌次级代谢产物的提取 | 第37页 |
| 2.2.14 IPTG诱导蛋白质表达 | 第37页 |
| 2.2.15 SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| 2.2.16 次级代谢产物的检测 | 第38-39页 |
| 第三章 基因重组异源表达可能性探索 | 第39-46页 |
| 3.1 重组质粒pPM4的构建 | 第39-42页 |
| 3.1.1 交换臂PB1、PB2及forP基因PCR扩增 | 第40-41页 |
| 3.1.2 重组质粒pPM4的构建与验证 | 第41-42页 |
| 3.2 橄榄星-绛红色小单孢菌基因组合工程菌的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.1 单交换菌株TP311的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.2 基因组合工程菌TP322的筛选 | 第43-44页 |
| 3.3 工程菌TP322代谢产物分析 | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 eryBⅢ基因替换tobM2工程菌的构建 | 第46-54页 |
| 4.1 重组质粒pBM6的构建 | 第46-50页 |
| 4.1.1 交换臂M21、M22及eryBⅢ基因PCR扩增 | 第47-48页 |
| 4.1.2 重组质粒pBM6的构建与验证 | 第48-50页 |
| 4.2 红霉素-黑暗链霉菌基因组合工程菌的构建 | 第50-52页 |
| 4.2.1 单交换菌株TB311的筛选与鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.2 基因组合工程菌TB322的筛选 | 第51-52页 |
| 4.3 工程菌TB322代谢产物分析 | 第52-53页 |
| 4.4 小结 | 第53-54页 |
| 第五章 eryCⅥ基因替换tobM2工程菌的构建 | 第54-61页 |
| 5.1 EryCⅥ蛋白表达 | 第54-55页 |
| 5.2 重组质粒pCM3的构建 | 第55-58页 |
| 5.2.1 eryCⅥ基因PCR扩增 | 第56-57页 |
| 5.2.2. 重组质粒pCM3的构建与验证 | 第57-58页 |
| 5.3 红霉素-黑暗链霉菌基因组合工程菌的构建 | 第58-59页 |
| 5.3.1 单交换菌株TC311的筛选与鉴定 | 第58-59页 |
| 5.3.2 基因组合工程菌TC322的筛选 | 第59页 |
| 5.4 工程菌TC322代谢产物分析 | 第59-60页 |
| 5.5 小结 | 第60-61页 |
| 第六章 eryG基因替换tobM2工程菌的构建 | 第61-68页 |
| 6.1 蛋白质EryG的表达 | 第61-62页 |
| 6.2 重组质粒pGM3的构建 | 第62-65页 |
| 6.2.1 eryG基因PCR扩增 | 第63-64页 |
| 6.2.2 重组质粒pGM3的构建与验证 | 第64-65页 |
| 6.3 红霉素-黑暗链霉菌基因组合工程菌的构建 | 第65-66页 |
| 6.3.1 单交换菌株TG311的筛选与鉴定 | 第65页 |
| 6.3.2 基因组合工程菌TG322的筛选 | 第65-66页 |
| 6.4 工程菌TG322代谢产物分析 | 第66-67页 |
| 6.5 单交换菌株次级代谢产物TLC分析 | 第67页 |
| 6.6 小结 | 第67-68页 |
| 第七章 ctcK基因替换tobM2工程菌的构建 | 第68-76页 |
| 7.1 重组质粒pKM3的构建 | 第68-71页 |
| 7.1.1 ctcK基因PCR扩增 | 第69-70页 |
| 7.1.2 重组质粒pKM3的构建与验证 | 第70-71页 |
| 7.2 金霉素-黑暗链霉菌基因组合工程菌的构建 | 第71-73页 |
| 7.2.1 单交换菌株TK311的筛选与鉴定 | 第71-72页 |
| 7.2.2 基因组合工程菌TK322的筛选 | 第72-73页 |
| 7.3 工程菌TK322代谢产物分析 | 第73-74页 |
| 7.4 TKQ322工程菌的构建及代谢产物分析 | 第74-75页 |
| 7.5 小结 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
