| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第17-28页 |
| 1.1 前言 | 第17-18页 |
| 1.2 吞蛋白的发现及命名 | 第18页 |
| 1.3 吞蛋白的结构特征及定位分析 | 第18-20页 |
| 1.3.1 吞蛋白结构特征 | 第18-19页 |
| 1.3.2 吞蛋白组织及亚细胞定位 | 第19-20页 |
| 1.4 吞蛋白功能分析 | 第20-25页 |
| 1.4.1 内吞作用 | 第20-22页 |
| 1.4.2 膜表面受体的内吞及信号转导 | 第22-23页 |
| 1.4.3 维持线粒体形状 | 第23页 |
| 1.4.4 凋亡 | 第23-24页 |
| 1.4.5 自噬 | 第24-25页 |
| 1.4.6 肿瘤的发生 | 第25页 |
| 1.4.7 疾病发生 | 第25页 |
| 1.5 本课题的研究内容及意义 | 第25-26页 |
| 1.5.1 本课题的研究内容 | 第25-26页 |
| 1.5.2 本课题的研究意义 | 第26页 |
| 1.6 论文内容安排 | 第26-28页 |
| 2 褐飞虱endophilin A、endophilin B基因的克隆及序列分析 | 第28-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 昆虫来源 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂和菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第28-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 褐飞虱总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 反转录合成cDNA | 第30页 |
| 2.2.3 褐飞虱endophilin A和endophilin B的引物合成 | 第30-31页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第31页 |
| 2.2.5 PCR产物割胶回收,连接转化及抗性筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.6 序列生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.3.1 褐飞虱Endo A和Endo B的基因克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.2 Endo A和Endo B编码的氨基酸组成及理化性质 | 第33-35页 |
| 2.3.3 多序列比对及系统进化树分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 信号肽分析 | 第36-38页 |
| 2.3.5 蛋白质结构预测 | 第38-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-43页 |
| 3 Endo A和Endo B基因的表达特性 | 第43-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.2.1 收集褐飞虱各龄期样本 | 第43页 |
| 3.2.2 引物设计 | 第43-44页 |
| 3.2.3 引物特异性验证 | 第44页 |
| 3.2.4 荧光定量PCR | 第44-45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.3.1 Endo A和Endo B的定量引物特异性验证 | 第45-46页 |
| 3.3.2 Endo A和Endo B基因在褐飞虱不同发育时期的表达分析 | 第46页 |
| 3.3.3 Endo A和Endo B基因在褐飞虱不同组织的表达分析 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-48页 |
| 4 Endo A和Endo B的原核表达、多克隆抗体的制备及表达定位 | 第48-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第48-50页 |
| 4.1.1 主要试剂和菌株 | 第48-50页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-56页 |
| 4.2.1 引物合成 | 第50页 |
| 4.2.2 基因克隆及阳性鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.3 原核表达载体构建 | 第51-52页 |
| 4.2.4 重组蛋白的表达与纯化 | 第52-54页 |
| 4.2.5 重组蛋白的多抗血清制备 | 第54页 |
| 4.2.6 抗体效价检测 | 第54-55页 |
| 4.2.7 Western blot检测 | 第55-56页 |
| 4.2.8 免疫荧光标记 | 第56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-63页 |
| 4.3.1 Endo A和Endo B基因克隆及原核表达载体构建 | 第56-57页 |
| 4.3.2 诱导条件优化 | 第57-59页 |
| 4.3.3 Endo A和Endo B融合蛋白的可溶性检测 | 第59页 |
| 4.3.4 重组蛋白纯化 | 第59-60页 |
| 4.3.5 Endo A和Endo B多克隆抗体的制备及效价测定 | 第60-61页 |
| 4.3.6 Endo A和Endo B多克隆抗体特异性分析 | 第61页 |
| 4.3.7 Endo A和Endo B在褐飞虱卵巢中的表达和定位 | 第61-63页 |
| 4.4 讨论 | 第63-64页 |
| 5 Endo A和Endo B基因的RNAi研究 | 第64-70页 |
| 5.1 实验材料 | 第64页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第64页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第64页 |
| 5.2 实验方法 | 第64-67页 |
| 5.2.1 dsRNA的合成 | 第64-66页 |
| 5.2.2 人工注射dsRNA | 第66页 |
| 5.2.3 RNAi干扰效果检测 | 第66页 |
| 5.2.4 免疫荧光标记 | 第66-67页 |
| 5.3 结果与分析 | 第67-69页 |
| 5.3.1 dsEndo A和dsEndo B的合成 | 第67页 |
| 5.3.2 qRT-PCR验证RNA干扰效果 | 第67-68页 |
| 5.3.3 RNA干扰后Endo A和Endo B在褐飞虱卵巢中的表达 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-70页 |
| 6 课题总结与展望 | 第70-72页 |
| 6.1 课题总结 | 第70页 |
| 6.2 创新点 | 第70-71页 |
| 6.3 展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 作者简历 | 第80页 |
