| 中英文缩略表 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第17-31页 |
| 1.1 植物SnRK1蛋白激酶研究进展 | 第17-26页 |
| 1.1.1 植物SnRK1的发现 | 第17页 |
| 1.1.2 植物SnRK1的结构 | 第17-20页 |
| 1.1.3 植物SnRK1的活性调节 | 第20-23页 |
| 1.1.3.1 磷酸化调节 | 第20-21页 |
| 1.1.3.2 翻译后修饰调节 | 第21-22页 |
| 1.1.3.3 腺苷酸调节 | 第22页 |
| 1.1.3.4 激素调节 | 第22-23页 |
| 1.1.3.5 糖及其他代谢物调节 | 第23页 |
| 1.1.4 植物SnRK1激酶的功能 | 第23-26页 |
| 1.1.4.1 植物SnRK1调节碳氮代谢 | 第24-25页 |
| 1.1.4.2 植物SnRK1调控植物的生长发育 | 第25页 |
| 1.1.4.3 植物SnRK1调节植物的胁迫响应 | 第25-26页 |
| 1.2 果实发育与糖代谢途径 | 第26-29页 |
| 1.2.1 果实品质与糖组分的关系 | 第26页 |
| 1.2.2 桃果实发育过程中糖组分含量及相关酶活性变化 | 第26-27页 |
| 1.2.3 果实发育过程中几种主要糖的代谢途径 | 第27-29页 |
| 1.2.3.1 山梨醇及其代谢 | 第27-28页 |
| 1.2.3.2 葡萄糖及其代谢 | 第28页 |
| 1.2.3.3 果糖及其代谢 | 第28-29页 |
| 1.2.3.4 蔗糖及其代谢途径 | 第29页 |
| 1.3 MADS-box转录因子RIN | 第29-30页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第30-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1.1 桃果实的材料与处理 | 第31页 |
| 2.1.1.2 超表达桃PpSnRK1α番茄材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1.3 拟南芥材料 | 第32页 |
| 2.1.2 菌株 | 第32页 |
| 2.1.3 载体 | 第32页 |
| 2.1.4 酶与生化试剂 | 第32页 |
| 2.1.5 引物 | 第32页 |
| 2.1.6 培养基 | 第32-34页 |
| 2.1.7 抗生素 | 第34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-43页 |
| 2.2.1 植物材料总RNA的提取(TRIzol试剂法) | 第34页 |
| 2.2.2 反转录cDNA第一链的合成 | 第34页 |
| 2.2.3 目的基因PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.2.4 目的基因PCR产物的回收 | 第35页 |
| 2.2.5 目的基因与克隆载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态DH5α的转化及质粒DNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.2.6.1 大肠杆菌感受态DH5α的转化 | 第35-36页 |
| 2.2.6.2 质粒DNA的提取 | 第36页 |
| 2.2.7 DNA序列测定 | 第36页 |
| 2.2.8 构建表达载体 | 第36页 |
| 2.2.9 农杆菌感受态制备与转化 | 第36-37页 |
| 2.2.9.1 LBA4404感受态的制备 | 第36页 |
| 2.2.9.2 LBA4404感受态的转化 | 第36-37页 |
| 2.2.10 植物转化方法 | 第37-38页 |
| 2.2.10.1 拟南芥转化 | 第37页 |
| 2.2.10.2 转基因拟南芥植株的筛选 | 第37-38页 |
| 2.2.11 SnRK1酶活性测定 | 第38页 |
| 2.2.12 可溶性糖含量的测定 | 第38页 |
| 2.2.13 可溶性蛋白质测定 | 第38页 |
| 2.2.14 桃果实SS、SPS、SDH及SOX酶活性的测定 | 第38-39页 |
| 2.2.15 果实中山梨醇、葡萄糖、果糖及蔗糖含量的测定 | 第39页 |
| 2.2.16 抗氧化酶活性及MDA含量测定 | 第39页 |
| 2.2.17 叶绿素含量的测定 | 第39页 |
| 2.2.18 酵母双杂交重组表达载体的构建及蛋白互作检测 | 第39-40页 |
| 2.2.19 双分子荧光互补实验 | 第40页 |
| 2.2.20 原核诱导蛋白表达及纯化 | 第40-42页 |
| 2.2.20.1 原核诱导蛋白 | 第40页 |
| 2.2.20.2 原核诱导蛋白纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.20.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第41-42页 |
| 2.2.21 本研究使用的软件 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-77页 |
| 3.1 桃果实生长发育不同时期SnRK1蛋白激酶活性及表达水平变化 | 第43-45页 |
| 3.1.1 桃果实不同发育时期SnRK1蛋白激酶活性变化 | 第43页 |
| 3.1.2 桃果实不同发育时期SnRK1蛋白激酶各编码亚基基因表达水平变化 | 第43-45页 |
| 3.2 桃果实生长发育阶段SDH、SOX、SS、SPS酶活性变化 | 第45-47页 |
| 3.3 不同疏果处理下,桃SnRK1激酶活性变化及果实发育情况 | 第47-50页 |
| 3.3.1 不同疏果条件下,桃果实生长发育变化 | 第47-49页 |
| 3.3.2 不同疏果处理下,桃果实SnRK1蛋白激酶的活性变化 | 第49-50页 |
| 3.4 外源海藻糖及山梨醇处理对桃果实SnRK1激酶活性及糖代谢的影响 | 第50-60页 |
| 3.4.1 外源海藻糖和山梨醇处理对桃果实SnRK1蛋白激酶活性的影响 | 第50-52页 |
| 3.4.2 海藻糖及山梨醇处理桃果实3h后SnRK1各亚基编码基因表达量变化 | 第52-53页 |
| 3.4.3 海藻糖及山梨醇处理桃果实后,SDH、SOX、SPS及SS酶活性变化 | 第53-56页 |
| 3.4.4 海藻糖及山梨醇处理桃果实后,果实中相关糖含量变化 | 第56-58页 |
| 3.4.5 酵母双杂交系统鉴定桃SnRK1与SDH、SS、SPS之间的相互作用 | 第58-59页 |
| 3.4.6 体外检测桃SnRK1蛋白激酶对SDH的磷酸化作用 | 第59-60页 |
| 3.5 PpSnRK1α在番茄中超表达对番茄果实发育的影响 | 第60-70页 |
| 3.5.1 桃SnRK1蛋白激酶α亚基的氨基酸序列对比 | 第60-61页 |
| 3.5.2 超表达PpSnRK1α番茄株系与野生型番茄WT作数字基因表达谱分析 | 第61页 |
| 3.5.3 PpSnRK1α超表达差异表达基因Pathway富集分析 | 第61-62页 |
| 3.5.4 超表达PpSnRK1α缩短了番茄果实的成熟周期 | 第62-64页 |
| 3.5.5 超表达PpSnRK1α番茄植株果实可溶性糖及淀粉含量显著提高 | 第64页 |
| 3.5.6 番茄果实中SnRK1α基因表达水平及不同发育时期SnRK1酶活性变化 | 第64-65页 |
| 3.5.7 酵母双杂交系统鉴定PpSnRK1α与转录因子SIRIN之间的相互作用 | 第65-66页 |
| 3.5.8 BiFC验证PpSnRK1α与转录因子SIRIN两蛋白间的相互作用发生在细胞核中 | 第66页 |
| 3.5.9 超表达PpSnRK1α番茄果实不同时期RIN基因的表达水平 | 第66-67页 |
| 3.5.10 超表达PpSnRK1α番茄果实不同时期RIN下游成熟相关靶基因的表达水平 | 第67-69页 |
| 3.5.11 超表达PpSnRK1α番茄与野生型番茄果实成熟时乙烯的释放量 | 第69-70页 |
| 3.6 桃SnRK1蛋白激酶γ亚基PpSnRK1γ1超表达拟南芥植株的功能分析 | 第70-77页 |
| 3.6.1 桃PpSnRK1γ1基因的氨基酸序列比对及进化树分析 | 第70-72页 |
| 3.6.2 桃PpSnRK1γ1基因的亚细胞定位 | 第72页 |
| 3.6.3 桃PpSnRK1γ1基因的启动子序列分析 | 第72-73页 |
| 3.6.4 PpSnRK1γ1基因的克隆与转化 | 第73-74页 |
| 3.6.5 超表达PpSnRK1γ1拟南芥植株的检测 | 第74页 |
| 3.6.6 超表达PpSnRK1γ1基因拟南芥的SnRK1激酶活性 | 第74-75页 |
| 3.6.7 高温胁迫处理对超表达PpSnRK1γ1拟南芥植株的影响 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-83页 |
| 4.1 桃SnRK1蛋白激酶响应外源糖信号参与糖代谢途径 | 第77-78页 |
| 4.1.1 糖信号与SnRK1蛋白激酶 | 第77页 |
| 4.1.2 SnRK1蛋白激酶调控关键酶活性参与糖代谢途径 | 第77-78页 |
| 4.2 桃PpSnRK1调控果实的成熟发育 | 第78-80页 |
| 4.2.1 桃PpSnRK1α与转录因子RIN互作 | 第78-79页 |
| 4.2.2 PpSnRK1参与RIN调控途径,促进果实的成熟发育 | 第79-80页 |
| 4.3 SnRK1在果实发育中的酶活特性及在果实品质形成中的作用 | 第80-81页 |
| 4.3.1 桃SnRK1在果实发育中的酶活特性及其各亚基表达情况 | 第80-81页 |
| 4.3.2 桃SnRK1在果实品质形成中的作用 | 第81页 |
| 4.4 桃SnRK1蛋白激酶γ亚基功能分析 | 第81-83页 |
| 5 结论 | 第83-84页 |
| 6 参考文献 | 第84-103页 |
| 附录 | 第103-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第107页 |
