| 致谢 | 第5-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-18页 |
| 1 PGCs与EG细胞,ES细胞的异同 | 第12页 |
| 2 原始生殖细胞的研究进展 | 第12-13页 |
| 3 原始生殖细胞的起源和发生 | 第13页 |
| 4 PGCs发生和发育的有关基因 | 第13-14页 |
| 4.1 Frigilis和stella | 第13-14页 |
| 4.2 Nanog | 第14页 |
| 4.3 其它相关基因 | 第14页 |
| 5 原始生殖细胞的生物学特性 | 第14-15页 |
| 5.1 原始生殖细胞的形态和生长特性 | 第14页 |
| 5.2 原始生殖细胞的多能性特征 | 第14-15页 |
| 6 PGCs细胞的分离培养及其影响因素 | 第15页 |
| 6.1 PGCs的分离纯化 | 第15页 |
| 6.2 胎龄 | 第15页 |
| 6.3 基本培养液及抗凋亡剂 | 第15页 |
| 7 原始生殖细胞应用的意义与前景 | 第15-16页 |
| 8 无血清无饲养层培养体系 | 第16-18页 |
| 8.1 无血清无饲养层培养基的特点 | 第16-17页 |
| 8.2 无血清无饲养层培养基的应用 | 第17页 |
| 8.3 无血清无饲养层培养的研究进展 | 第17-18页 |
| 试验一 兔PGCs的无血清培养 | 第18-32页 |
| 引言 | 第18页 |
| 1 材料与方法 | 第18-25页 |
| 1.1 试验材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第18页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第19页 |
| 1.2 主要溶液的配制与储存 | 第19-21页 |
| 1.2.1 PBS缓冲液的配制 | 第19-20页 |
| 1.2.2 消化液的配制 | 第20页 |
| 1.2.3 胚胎成纤维细胞培养液的配制 | 第20页 |
| 1.2.4 PGCs常规培养液的配制 | 第20页 |
| 1.2.5 PGCs无血清培养液的配制 | 第20页 |
| 1.2.6 1mol/L盐酸的配制 | 第20页 |
| 1.2.7 1mol/L氢氧化钠的配制 | 第20页 |
| 1.2.8 100μg/mL丝裂霉素C存储液的配置 | 第20-21页 |
| 1.2.9 双抗的分装冻存 | 第21页 |
| 1.2.10 KSR的分装冻存 | 第21页 |
| 1.2.11 冻存液 | 第21页 |
| 1.3 试验方法 | 第21-25页 |
| 1.3.1 REF的分离培养 | 第21页 |
| 1.3.2 饲养层的制备 | 第21页 |
| 1.3.3 兔PGCs的分离培养 | 第21-22页 |
| 1.3.4 兔PGCs的鉴定 | 第22-24页 |
| 1.3.4.1 形态学鉴定 | 第22页 |
| 1.3.4.2 碱性磷酸酶(AKP)染色 | 第22页 |
| 1.3.4.3 RT-PCR检测转录因子OCT-4的表达 | 第22-24页 |
| 1.3.5 无血清培养液对兔PGCs的影响 | 第24页 |
| 1.3.6 兔PGCs的传代培养 | 第24页 |
| 1.3.7 兔PGCs的冻存 | 第24-25页 |
| 1.3.8 兔PGCs的复苏与扩增 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-30页 |
| 2.1 兔PGCs生长行为的观察 | 第25页 |
| 2.2 碱性磷酸酶(AKP)染色检测结果 | 第25-26页 |
| 2.3 RT-PCR检测 | 第26-27页 |
| 2.4 不同培养液对兔PGCs的影响 | 第27-30页 |
| 2.4.1 形态学特征 | 第27页 |
| 2.4.2 PGCs的细胞生长曲线 | 第27-29页 |
| 2.4.3 不同代数细胞冻存后的复苏效果 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-31页 |
| 3.1 PGCs的分离培养 | 第30页 |
| 3.2 培养液的选择 | 第30-31页 |
| 3.3 PGCs的冻存与复苏 | 第31页 |
| 4 小结 | 第31-32页 |
| 试验二 PGCs无血清无饲养层培养方法的建立 | 第32-44页 |
| 引言 | 第32页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| 1.1 试验材料 | 第32-34页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第32页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第33-34页 |
| 1.2 主要溶液的配制与储存 | 第34-35页 |
| 1.2.1 兔PGCs无血清培养液的配制 | 第34页 |
| 1.2.2 兔PGCs无血清无饲养层培养液的配制 | 第34页 |
| 1.2.3 PGCs常规培养液的配制 | 第34页 |
| 1.2.4 无血清无饲养层条件培养液的制备 | 第34-35页 |
| 1.3 试验方法 | 第35-38页 |
| 1.3.1 兔PGCs无饲养层条件培养基培养 | 第35页 |
| 1.3.2 兔PGCs无血清无饲养层培养 | 第35页 |
| 1.3.3 PGCs集落计数及集落大小评估 | 第35页 |
| 1.3.4 兔PGCs的鉴定 | 第35-37页 |
| 1.3.5 兔PGCs的分化性检验 | 第37页 |
| 1.3.6 兔PGCs的冻存 | 第37页 |
| 1.3.7 兔PGCs的复苏与扩增 | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-42页 |
| 2.1 无血清无饲养层培养兔PGCs形态学观察 | 第38页 |
| 2.2 PGCs集落记数及集落大小百分数分析 | 第38-39页 |
| 2.3 不同培养体系不同代数OCT-4基因的表达 | 第39-40页 |
| 2.4 体外拟胚体的形成 | 第40页 |
| 2.5 不同代数细胞冻存后的复苏效果 | 第40-42页 |
| 3 讨论 | 第42-43页 |
| 3.1 PGCs未分化性 | 第42页 |
| 3.2 添加细胞因子对PGCs的作用 | 第42-43页 |
| 4 小结 | 第43-44页 |
| 创新点 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| ABSTRACT | 第51-52页 |