| 课题来源 | 第3-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第15-25页 |
| 1.1 研究背景 | 第15-19页 |
| 1.2 研究进展 | 第19-23页 |
| 1.2.1 CRISPR-Cas功能的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.2 在细菌中CRISPR-Cas与毒力的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2.3 空肠弯曲杆菌中CRISPR-Cas系统 | 第22-23页 |
| 1.3 研究目的意义和内容 | 第23-25页 |
| 1.3.1 研究的目的意义 | 第23-24页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-46页 |
| 2.1 菌株、细胞 | 第25页 |
| 2.2 抗菌药物及配制 | 第25页 |
| 2.3 培养基与试剂 | 第25-28页 |
| 2.4 仪器设备 | 第28-29页 |
| 2.5 空肠弯曲杆菌的复苏及基因组的提取 | 第29-30页 |
| 2.6 载体的构建 | 第30-37页 |
| 2.6.1 载体构建方案 | 第30-31页 |
| 2.6.2 突变载体的构建 | 第31-37页 |
| 2.7 突变体的构建 | 第37-38页 |
| 2.7.1 自然转化 | 第37页 |
| 2.7.2 电转化 | 第37-38页 |
| 2.7.3 突变体鉴定 | 第38页 |
| 2.8 表型检测 | 第38-43页 |
| 2.8.1 生长力的测定 | 第38-39页 |
| 2.8.2 鞭毛迁移力的测定 | 第39页 |
| 2.8.3 透射电镜观察鞭毛形态 | 第39页 |
| 2.8.4 生物膜的测定 | 第39-40页 |
| 2.8.5 采用RAW264.7细胞测定粘附力和侵袭力 | 第40-41页 |
| 2.8.6 采用Caco-2细胞测定粘附力和侵袭力 | 第41-42页 |
| 2.8.7 采用RAW264.7细胞测定生存能力 | 第42页 |
| 2.8.8 细胞毒素实验 | 第42-43页 |
| 2.9 差异基因筛选 | 第43-46页 |
| 2.9.1 RNA-Seq样品的准备 | 第43页 |
| 2.9.2 差异表达基因的检测与分析及实时荧光定量验证 | 第43-46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-76页 |
| 3.1 细菌复苏和DNA提取的结果 | 第46页 |
| 3.2 突变载体的构建 | 第46-50页 |
| 3.2.1 同源臂及筛选基因的扩增 | 第46-48页 |
| 3.2.2 采用融合PCR进行片段连接 | 第48-49页 |
| 3.2.3 重组质粒的验证 | 第49-50页 |
| 3.2.4 重组质粒提取结果 | 第50页 |
| 3.3 突变体的验证 | 第50-52页 |
| 3.4 表型检测结果 | 第52-61页 |
| 3.4.1 生长力的测定 | 第52-53页 |
| 3.4.2 迁移力的测定 | 第53-54页 |
| 3.4.3 鞭毛形态 | 第54-55页 |
| 3.4.4 生物膜的测定 | 第55-57页 |
| 3.4.5 粘附力与侵袭力的测定 | 第57-59页 |
| 3.4.6 菌株在RAW264.7细胞中的生存能力考察 | 第59-60页 |
| 3.4.7 细胞毒素实验 | 第60-61页 |
| 3.5 RNA-Seq结果 | 第61-76页 |
| 3.5.1 差异基因分析 | 第61-65页 |
| 3.5.2 RT-qPCR验证结果 | 第65-68页 |
| 3.5.3 表达差异基因GO富集分析 | 第68-71页 |
| 3.5.4 表达差异KO分析 | 第71-76页 |
| 4 讨论 | 第76-80页 |
| 4.1 Cas9基因对空肠弯曲杆菌非毒力方面的影响 | 第76-77页 |
| 4.2 Cas9基因对空肠弯曲杆菌毒力的影响 | 第77-80页 |
| 5 全文总结 | 第80-82页 |
| 文献综述 | 第82-91页 |
| 1 CRISPR-Cas系统 | 第82-87页 |
| 1.1 CRISPR-Cas系统的结构与分类 | 第82-84页 |
| 1.2 CRISPR-Cas系统的作用机制 | 第84-87页 |
| 2 CRISPR-Cas系统与耐药的关系 | 第87-88页 |
| 3 CRISPR-Cas系统与毒力的关系 | 第88-90页 |
| 4 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 个人简介 | 第109-110页 |
| 附录 | 第110-128页 |
| 对答辩委员意见的答复 | 第128-129页 |
